Засохшее пятно крови - Dried blood spot

Анализ сухих пятен крови (DBS) - это форма биосэмплинг где образцы крови промокают и сушат на фильтровальной бумаге. Высушенные образцы можно легко отправить в аналитическая лаборатория и проанализированы различными методами, такими как Амплификация ДНК или же ВЭЖХ.

История

Ивар Банг впервые описал DBS как необычный метод отбора проб в 1913 году.[1] Идея о том, что капиллярная кровь, полученная при прокалывании пятки или пальца и нанесенная на фильтровальную бумагу, может быть использована для скрининга метаболических заболеваний у больших популяций новорожденных, была представлена ​​в Шотландии Роберт Гатри в 1963 году. Неонатальный скрининг на фенилкетонурия стала общенациональной в 1969-70 гг. С того времени, Гатри Образцы карточек обычно собирали у младенцев в более чем 20 странах для скрининга на фенилкетонурию, а в последнее время - на врожденный гипотиреоз, серповидноклеточные заболевания и ВИЧ-инфекция. Ограничения чувствительности и специфичности при скрининге таких малых объемов крови ограничивали использование засохших пятен крови на многие годы. Однако недавние достижения, такие как производство моноклональные антитела экспрессия синтетических белков и внедрение полимеразной цепной реакции помогли преодолеть многие из этих проблем.[2]

Этот тип анализа крови теперь доступен для использования в домашних условиях потребителями в США. Доступные анализы крови включают витамин D, эстроген, тестостерон, кортизол, ТТГ и липиды. Нью-Йорк - единственный штат, в котором запрещено проводить анализ крови в домашних условиях.

Процедура

Образцы сухих пятен крови собирают путем нанесения нескольких капель крови, взятых ланцетом с пальца, пятки или пальца ноги, на специально изготовленную впитывающую фильтровальную бумагу. Дают крови полностью пропитать бумагу и сушат на воздухе в течение нескольких часов.[3] Образцы хранятся в пластиковых мешках с низкой газопроницаемостью и осушитель добавляется для снижения влажности и может храниться при температуре окружающей среды даже в тропическом климате.

Оказавшись в лаборатории, техники отделяют небольшой диск с пропитанной бумагой от листа с помощью автоматического или ручного дырокола, опуская диск на плоскую пластину для титрования. Кровь элюируется физиологическим раствором с фосфатным буфером, содержащим 0,05% Подросток 80 и 0,005% азид натрия, в течение ночи при 4 ° C. Полученный планшет, содержащий элюаты, образует «эталон», из которого можно делать разведения для последующего тестирования.[2]

В качестве альтернативы пробивке бумажного диска последние решения по автоматизации извлекают пробу, пропуская элюент через фильтр, не выбивая его.[4][5] Швейцарская компания CAMAG разработала автоматизацию, включающую применение внутреннего стандарта предварительной экстракции.[6]

Анализ сухих пятен крови на ВИЧ-инфекцию

Эта технология обещает расширить диагностические услуги для ВИЧ-инфицированных младенцев в условиях ограниченных ресурсов из-за более длительного срока службы образцов, уменьшения потребности в охлаждении и менее инвазивного характера теста по сравнению с другими методами. В отличие от ELISA тестирование на антитела к ВИЧ в крови, которые могут передаваться младенцам во время беременности независимо от самого вируса, можно использовать анализ сухих пятен крови для обнаружения генетического материала настоящего вируса, тем самым избегая вероятности заражения вирусом. ложный положительный результат результат. Тестирование сухих пятен крови на ВИЧ не считается достаточно чувствительным для диагностического тестирования, но может быть полезно для оценки распространенности ВИЧ посредством эпиднадзора. Образцы DBS также несут меньшую биологическую опасность для обслуживающего персонала и их легче транспортировать или хранить, чем образцы жидкой крови.[7]

Принцип

Причина стабильности ДНК, РНК или белка может быть связана с тем фактом, что биологический материал связывается с матрицей фильтровальной бумаги, и процесс сушки исключает воду, которая является важным фактором, необходимым для действия протеазы или нуклеазы. Связывание биологического материала также связывает несколько ингибиторов, которые могут мешать различным методам амплификации нуклеиновых кислот.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Закария и др., Розита (2016). «Преимущества и проблемы анализа сухих пятен крови с помощью масс-спектрометрии в общем процессе тестирования». EJIFCC. 27 (4): 288–317. ЧВК  5282914. PMID  28149263.
  2. ^ а б Паркер С.П., Кубитт В.Д. (сентябрь 1999 г.). «Использование образца сухой капли крови в эпидемиологических исследованиях». J. Clin. Патол. 52 (9): 633–9. Дои:10.1136 / jcp.52.9.633. ЧВК  501537. PMID  10655983.
  3. ^ «Информационный лист: засохшая кровь». Рекомендации по отправке высушенных образцов пятен крови. Центры по контролю и профилактике заболеваний: Управление здоровья и безопасности: Отдел биобезопасности. 9 марта 1995 г.
  4. ^ Ganz, N; Синграса, М; Николас, L; Gutierrez, M; Dingemanse, J; Дёбелин, Вт; Глински, М. (15 февраля 2012 г.). «Разработка и проверка полностью автоматизированного онлайн-анализа сухих пятен крови человека на бозентан и его метаболиты с использованием карты образцов и системы DBS Prep». Журнал хроматографии B. 885-886: 50–60. Дои:10.1016 / j.jchromb.2011.12.012. PMID  22227055.
  5. ^ Spark Holland. «Проточная десорбция (FTD)». Получено 11 ноября 2012.
  6. ^ «ДБС-МС 500». www.camag.com. Получено 18 января 2016.
  7. ^ Кассол С., Салас Т., Гилл М.Дж. и др. (Декабрь 1992 г.). «Стабильность высушенных пятен крови для обнаружения ДНК вируса иммунодефицита человека методом полимеразной цепной реакции». J. Clin. Микробиол. 30 (12): 3039–42. ЧВК  270585. PMID  1452682.