Гидролиз диацетата флуоресцеина - Fluorescein diacetate hydrolysis

Флуоресцеина диацетат (FDA) гидролиз анализы могут использоваться для измерения ферментная активность микробов в образце. Создается яркое желто-зеленое свечение, которое становится наиболее сильным при максимальной активности ферментов. Это можно количественно оценить с помощью спектрофлуориметр.

Приложения

Гидролиз FDA часто используется для измерения активности в образцах почвы и компоста; однако он может не дать точных показаний, если микробы с более низкими фазами активности, такие как эстеразы, расщепляют флуоресцеин первый.

Он также используется в сочетании с иодид пропидия (PI) в определить жизнеспособность в эукариотических клетках. Живые клетки будут активно преобразовывать нефлуоресцентный FDA в зеленое флуоресцентное соединение флуоресцеин, признак жизнеспособности; в то время как ядра клеток с нарушенной мембраной будут флуоресцировать красным цветом, что является признаком гибели клетки. В настоящее время окрашивание FDA / PI является стандартной оценкой жизнеспособности островков поджелудочной железы человека с точки зрения пригодности для трансплантации, когда оценка жизнеспособности превышает 70%.

Подготовка

Исходный раствор FDA готовят путем растворения 5 мг диацетата флуоресцеина в 1 мл. ацетон,[1] и сахароза может быть добавлен для тестирования жизнеспособности живых клеток. Пятно FDA необходимо хранить в темноте при температуре 4 ° C, иначе оно испортится.[2]

использованная литература

  1. ^ «ИСПЫТАНИЕ НА ЖИЗНЕННОСТЬ С ФЛУОРЕСЦЕИН ДИАЦЕТАТОМ (FDA)». www.cabri.org.
  2. ^ Fontvieille, D.A .; Outaguerouine, A .; Тевено, Д. (1992). «Гидролиз диацетата флуоресцеина как мера микробной активности в водных системах: применение к активированному илу» (PDF). Экологические технологии. 13 (6): 531–540. Дои:10.1080/09593339209385181.

3. «Анализ гидролиза диацетата флуоресцеина» http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/Von_Sigler/LEPR_Protocols_files/FDA%20assay.pdf