Фенол экстракция - Phenol extraction

Фенол экстракция это технология обработки, используемая для приготовления фенолы в качестве сырья, компаундов или добавок для промышленных обработка древесины и для химической промышленности. Экстракция фенола также представляет собой лабораторный процесс очистки ДНК образцы.

Фенол (C6ЧАС5OH) представляет собой водорастворимое соединение, состоящее из фенильная группа (-C6ЧАС5) связаны с гидроксильная группа (-ОЙ).

В этом методе смесь ТЕ (или Трис -Этилендиаминтетрауксусной кислоты ) и фенол сочетается с равным объемом водной ДНК образец. После перемешивания и разделения центрифугированием водный слой экстрагируют и дополнительно обрабатывают эфир. Затем ДНК концентрируется осаждение этанолом.

Техника экстракции фенолом часто используется для очистки образцов нуклеиновых кислот, взятых из клеток. Чтобы получить образцы нуклеиновых кислот, клетка должна быть лизирована, а нуклеиновые кислоты отделены от всех других клеточных материалов. Фенол является полезным соединением для разрушения избыточных клеточных материалов, которые в противном случае загрязнили бы образец нуклеиновой кислоты.

Фенол является таким эффективным очистителем образцов нуклеиновых кислот по двум причинам. Во-первых, это неполярное соединение. Поскольку нуклеиновые кислоты очень полярны, они не растворяются в присутствии фенола. Во-вторых, фенол имеет плотность 1,07 г / см.3, что выше плотности воды (1,00 г / см3). Таким образом, когда фенол добавляется к раствору образца клеток, вода и фенол остаются разделенными. При добавлении фенола в раствор и центрифугировании образуются две «фазы». В верхней части раствора находится водная полярная фаза, содержащая нуклеиновые кислоты и воду, и органическая фаза, содержащая денатурированные белки и другие клеточные компоненты, в нижней части раствора. Водная фаза всегда находится поверх органической, потому что, как упоминалось выше, фенол плотнее воды. Нуклеиновые кислоты полярны и поэтому остаются в водной фазе, тогда как неполярные клеточные компоненты переходят в органическую фазу.[1][2]После добавления фенола к образцу его центрифугируют, и образуются водная и органическая («фенол») фазы.

Фенол часто используется в комбинация с хлороформом. Целью добавления хлороформа вместе с фенолом является обеспечение четкого разделения водной и органической фаз. Хлороформ и фенол хорошо смешиваются вместе, в отличие от фенола и воды. Плотность хлороформа 1,47 г / см3, выше, чем у воды и фенола. Смешивание хлороформа и фенола создает более плотный раствор, чем один фенол, и поэтому отделение органической фазы от водной даже четче, чем если бы к образцу клеток был добавлен только фенол. В водной фазе меньше перекрестного загрязнения из органической фазы. Это полезно, когда водную фазу удаляют из раствора, чтобы получить образец чистой нуклеиновой кислоты.

pH - важный фактор, который следует учитывать при методике экстракции фенолом. Чтобы фенол был эффективным, pH раствора должен варьироваться в зависимости от того, что экстрагируется. В случае очистки ДНК используется pH 7,0–8,0. Если целью эксперимента является получение образцов очищенной РНК, используется pH около 4,5. Из-за отрицательного заряда фосфатов на основной цепи ДНК, снижение pH раствора приведет к нейтрализации. PH 4,5 имеет более высокую концентрацию ионов H +, которые нейтрализуют отрицательные фосфатные заряды и вызывают растворение ДНК в органической фазе, в то время как РНК имеет дополнительную гидроксильную группу в пентозном сахаре, которая позволяет РНК оставаться в водной фазе.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ [1][мертвая ссылка ]
  2. ^ Освальд, Ник (9 июля 2016 г.). «Основы: как работает экстракция фенола». Bitesize Bio.

внешняя ссылка