Диск диффузионный тест - Disk diffusion test

Не путать с Тест Клейхауэра – Бетке, который также часто называют «тестом КБ».
Метод диско-диффузионного агара проверяет эффективность антибиотиков на конкретный микроорганизм. В чашку с агаром сначала насыпают бактерии, затем на нее кладут бумажные диски с антибиотиками. Затем бактериям дают возможность расти на агаризованной среде, а затем наблюдают за ростом и влиянием на нее антибиотика. Количество места вокруг каждого диска с антибиотиком указывает на летальность этого антибиотика для рассматриваемых бактерий. Высокоэффективные антибиотики (диск C) образуют широкое кольцо без роста бактерий, в то время как неэффективный антибиотик (диск A) вообще не изменяет концентрацию окружающих бактерий. Эффективность промежуточных антибиотиков (диск B) можно измерить с помощью зоны их ингибирования. Этот метод используется для определения наилучшего антибиотика для лечения нового или устойчивого к лекарствам патогена.

В диск диффузионный тест, или же тест диффузии в агаре, или же Тест Кирби – Бауэра (диско-диффузионный тест на чувствительность к антибиотикам, диско-диффузионный тест на чувствительность к антибиотикам, тест KB) - это тест на чувствительность к антибиотикам. Он использует диски с антибиотиками, чтобы проверить степень воздействия этих антибиотиков на бактерии. В этом тесте пластины, содержащие антибиотики, помещаются на агар чашку, куда были помещены бактерии, и пластину оставляют для инкубации. Если антибиотик останавливает рост бактерий или же убивает бактерии, вокруг пластины будет место, где бактерии не разрослись настолько, чтобы их можно было увидеть.[1][2] Это называется зоной торможения.

Размер этой зоны зависит от многих факторов, одним из которых является то, насколько эффективен антибиотик в остановке роста бактерий. Другой фактор, который будет влиять на размер зоны, - это диффузия антибиотика в агаризованной среде, которая варьируется в зависимости от молекулярной конфигурации антибиотика. После измерения диаметра зоны его необходимо сравнить с базой данных стандартов зоны, чтобы определить, является ли изучаемая бактерия восприимчивой, умеренно чувствительной или устойчивой к рассматриваемому антибиотику.

Чистую бактериальную культуру суспендируют в буфере, стандартизируют по мутности и равномерно наносят мазками на культуральный планшет. Затем на поверхность агара помещают диск из фильтровальной бумаги, пропитанный исследуемым соединением. Соединение диффундирует из фильтровальной бумаги в агар. Концентрация соединения будет самой высокой рядом с диском и будет уменьшаться по мере удаления от диска. Если соединение эффективно против бактерий при определенной концентрации, никакие колонии не будут расти там, где концентрация в агаре больше или равна эффективной концентрации. Это зона торможения. Это вместе со скоростью распространения антибиотика используется для оценки чувствительности бактерий к этому конкретному антибиотику. В общем, большие зоны коррелируют с меньшими минимальная ингибирующая концентрация (МПК) антибиотика для этих бактерий. Ингибирование, производимое тестом, сравнивают с ингибированием, вызываемым известной концентрацией эталонного соединения. Эта информация может быть использована для выбора подходящих антибиотиков для борьбы с конкретной инфекцией.[3]

Стандартизация

Посмотрите крупным планом на результаты теста диффузии в агаре.

Инокуляцию проводят бульонной культурой, разбавленной до 0,5. Стандарт мутности МакФарланда, что примерно эквивалентно 150 миллионам клетки за мл.

Тестирование Кирби – Бауэра: белые пластины, содержащие антибиотики показано на пластине бактерии. Некоторые вафли окружены кружками, в которых наблюдается недостаточный рост бактерий, что указывает на чувствительность к антибиотику.

Подготовка

Все аспекты процедуры Кирби-Бауэра стандартизированы для обеспечения последовательных и точных результатов. По этой причине лаборатория должна придерживаться этих стандартов. Носители, используемые в тестировании Кирби – Бауэра, должны быть Агар Мюллера-Хинтона глубиной всего 4 мм, разливают в чашки Петри диаметром 100 или 150 мм. В pH уровень агара должен быть от 7,2 до 7,4.

Процедура инкубации

  1. Используя асептическая техника, поместите стерильный тампон в бульон культура определенного организма, а затем осторожно удалите излишки жидкости, осторожно нажав или вращая тампон внутри пробирки.
  2. Используя тампон, нанесите штрих Агар Мюллера-Хинтона пластина для образования бактериального газона.
    • Чтобы получить равномерный рост, нанесите штрих тампоном в одном направлении, поверните планшет на 90 ° и снова нанесите штрих в этом направлении.
    • Повторите это вращение 3 раза.
  3. Дайте пластине высохнуть примерно 5 минут.
  4. Используйте дозатор дисков с антибиотиками, чтобы распределить диски, содержащие определенные антибиотики, на тарелку.
  5. С помощью стерилизованных в пламени щипцов осторожно прижмите каждый диск к агару, чтобы убедиться, что диск прикреплен к агару.
  6. Планшеты следует инкубировать в течение ночи при инкубация температура 37 ° C (98,6 ° F).[4]
Чашки Петри, показывающие зону ингибирования различными экстрактами, такими как петролейный эфир, хлороформ, этанол и ацетон.[5]

Метод оксфордской чашки пенициллина

Диски, содержащие увеличивающиеся концентрации антибиотиков, помещают на засеянный бактериальный газон на поверхности агара, и чашки инкубируют. Размеры зоны измеряются от края диска до конца чистой зоны. Интерпретация более сложна в популяциях со смешанной восприимчивостью (ср. BSAC ). Они отображаются в виде линейных размеров или квадратов расстояний в зависимости от натурального логарифма концентрации антибиотика на дисках. MIC определяется из нулевой точки пересечения линейной регрессии, соответствующей данным (ср. agardiffusion.com ). Сам перехват - это логарифм ВПК. Наклон линии регрессии связан с коэффициентом диффузии этого конкретного антибиотика в агаре.[6]

Смотрите также

дальнейшее чтение

  • Бауэр, Альфред В. (1 августа 1959 г.). «Однодисковое тестирование стафилококков на чувствительность к антибиотикам». Архивы внутренней медицины. 104 (2): 208–16. Дои:10.1001 / archinte.1959.00270080034004. PMID  13669774.
  • Бауэр, AW; Кирби, ВМ; Шерис, JC; Терк, М. (апрель 1966 г.). «Тестирование чувствительности к антибиотикам стандартным методом с одним диском». Американский журнал клинической патологии. 45 (4): 493–6. Дои:10.1093 / ajcp / 45.4_ts.493. PMID  5325707.
  • Бауэр, AW; Кирби, ВМ; Шерис, JC; Терк, М. (март 1966 г.). «Тестирование чувствительности к антибиотикам стандартным методом с одним диском». Технический бюллетень реестра медицинских технологов. 36 (3): 49–52. PMID  5908210.

Рекомендации

  1. ^ «Бактериальное освещение» (PDF). Получено 2013-05-24.
  2. ^ Браун Д.Ф., Котари Д. (1975). «Сравнение дисков с антибиотиками из разных источников». J. Clin. Патол. 28 (10): 779–83. Дои:10.1136 / jcp.28.10.779. ЧВК  475859. PMID  1214010.
  3. ^ Моханти, А. (2010): Физиохимическое и антимикробное исследование многотравья. Pharmacie globale. Vol. 4 (4) 1-3.
  4. ^ «Архивная копия». Архивировано из оригинал в 2013-07-31. Получено 2013-09-01.CS1 maint: заархивированная копия как заголовок (связь)
  5. ^ Саху Б. К., Антимикробные свойства надземной части Сесбания крупноцветковая (Линн.), Фармацевтический колледж Барпали, Индия, * th semester Project 2013
  6. ^ Бонев, Б; Хупер, Дж; Паризо, Дж. (Июнь 2008 г.). «Принципы оценки чувствительности бактерий к антибиотикам с использованием метода диффузии в агаре». Журнал антимикробной химиотерапии. 61 (6): 1295–301. Дои:10.1093 / jac / dkn090. PMID  18339637.