Чашка агара - Agar plate
| Использует | Микробиологическая культура Изобразительное искусство |
|---|---|
| Похожие материалы | чашка Петри Среда роста |
An пластина с агаром это чашка Петри который содержит агар как твердый среда роста плюс питательные вещества, используемые для культура микроорганизмы. Иногда для воздействия на рост добавляют селективные соединения, например антибиотики.[1]
Отдельные микроорганизмы, помещенные на чашку, превратятся в отдельные колонии, каждый клон генетически идентичен индивидуальному организму-предку (за исключением низкого, неизбежного мутация ). Таким образом, планшет можно использовать для оценки концентрации организмов в жидкая культура или подходящее разведение этой культуры с использованием счетчик колоний или для создания генетически чистых культур из смешанной культуры генетически разных организмов.
Доступно несколько методов для нанесения пластин на клетки. Один из методов известен как "полосы ". В этой технике капля культуры на конце тонкой, стерильный Проволочная петля, иногда называемая инокулятором, проходит по поверхности агара, оставляя за собой микроорганизмы, большее число в начале полоски и меньшее число в конце. В какой-то момент во время успешной «полоски» количество депонированных организмов будет таким, что отдельные отдельные колонии будут расти в этой области, которую можно удалить для дальнейшего культивирования с использованием другой стерильной петли. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы не допустить загрязнения чашек.[1]
Еще один способ высевания организмов на чашки с агаром рядом с полосами - это точечный анализ. Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушками). Третий используемый метод - использование стерильных стеклянных шариков для нанесения клеток на поверхность. В этом методе клетки выращивают в жидкой культуре, небольшой объем которой наносят на чашку с агаром и затем распределяют вместе с шариками. Покрытие реплики это еще один метод для высева клеток на чашки с агаром. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы предотвратить загрязнение чашек с агаром. Таким образом, покрытие часто выполняется в шкаф с ламинарным потоком или на рабочем столе рядом с бунзеновская горелка.[2]
История
В 1881 г. Фанни Гессе, которая работала техником у своего мужа Вальтер Гессе в лаборатории Роберт Кох, предложил агар в качестве эффективного закрепляющего агента, поскольку в течение некоторого времени он был обычным явлением при приготовлении джема.[3]
Типы
Как и другие ростовые среды составы агара, используемые в чашках, могут быть классифицированы как «определенные» или «неопределенные»; определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому известен точный молекулярный состав, тогда как неопределенная среда производится из натуральных продуктов, таких как Экстракт дрожжей, где точный состав неизвестен.[4]
Чашки с агаром могут быть сформулированы как разрешающие, с целью обеспечения роста любых присутствующих организмов, так и ограничительные или селективные, с целью обеспечения роста только определенной подгруппы этих организмов.[5] Это может иметь форму потребности в питании, например, предоставление определенного соединения, такого как лактоза как единственный источник углерод и тем самым отбирая только те организмы, которые могут метаболизировать это соединение, или путем включения определенного антибиотика или другого вещества для отбора только организмов, которые стойкий к этому веществу. Это до некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными медиа; Неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестную комбинацию очень многих органических молекул, обычно более терпимы с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого круга организмов, в то время как определенные среды могут быть точно адаптированы для отбора организмов с конкретными свойствами.
Чашки с агаром также могут быть индикаторными чашками, в которых организмы отбираются не на основе роста, а вместо этого отличаются изменением цвета в некоторых колониях, обычно вызванным действием фермент на какое-то соединение, добавленное в среду.[6]
Чашки инкубируют от 12 часов до нескольких дней в зависимости от выполняемого теста.
Некоторые часто используемые типы чашек с агаром:
Кровяной агар
Пластина с кровяным агаром
Чашки с кровяным агаром (БАП) содержат кровь млекопитающих (обычно овец или лошадей), обычно в концентрации 5–10%. BAP - это обогащенные дифференциальные среды, используемые для выделения привередливый организмов и обнаруживать гемолитический Мероприятия. β-Гемолитическая активность показывает лизис и полное переваривание содержимого эритроцитов, окружающих колонию. Примеры включают Гемолитический стрептококк. α-Гемолиз вызывает только частичный лизис красных кровяных телец (клеточная мембрана остается неповрежденной) и приобретает зеленый или коричневый цвет из-за преобразования гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans. γ-Гемолиз (или негемолитический) - это термин, относящийся к отсутствию гемолитической активности.[7] BAP также содержат мясной экстракт, триптон, хлорид натрия, и агар.
Шоколадный агар
Шоколадный агар тип чашки кровяного агара, в которой клетки крови были лизированный нагреванием ячеек до 56 ° C. Он используется для выращивания привередливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae. Нет шоколад фактически содержится в пластине; он назван только по окраске.
Агар с конской кровью
Агар с конской кровью это разновидность обогащенных кровью микробиологических питательных сред. Поскольку он обогащен, он способствует росту некоторых требовательных бактерий и позволяет определять гемолитическую активность этих бактериальных культур.
Агар Тайера-Мартина
Агар Тайера-Мартина шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae.
Тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахарозный агар
Тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахарозный агар усиливает рост Вибрион виды, включая Холерный вибрион.[8]
Общие бактериальные среды
- Желчный эскулиновый агар используется для изоляции Энтерококк и группа D Стрептококк разновидность
- CLED агар – цистеин, лактоза, агар с дефицитом электролитов используется для выделения и дифференциации бактерий мочевыводящих путей, поскольку он ингибирует Протей скопления видов и могут различать ферментеры лактозы и неферментеры.
- Гранада средняя используется для выделения и дифференциации группы B Стрептококк, Streptococcus agalactiae из клинических образцов. Он растет в среде Гранады, поскольку красные колонии и большинство сопутствующих бактерий подавляются.
- Кишечный агар гектоен предназначен для выделения и восстановления фекальных бактерий семейства Энтеробактерии. Это особенно полезно при изоляции Сальмонелла и Шигелла.
- Бульон лизогении
- МакКонки агар это селективная и дифференциальная среда, используемая для различения Грамотрицательный бактерии, подавляя рост Грамположительный бактерии. Добавление солей желчных кислот и кристально-фиолетовый к агару подавляет рост большинства грамположительных бактерий, что делает агар МакКонки селективным. Лактоза и нейтральный красный добавляются, чтобы отличить ферментеры лактозы, которые образуют розовые колонии, от неферментеров лактозы, которые образуют прозрачные колонии. Альтернативная среда, эозин метиленовый синий служит аналогичной цели.
- Маннитол солевой агар также является селективной и дифференциальной средой. В маннитол указывает на организмы, которые ферментируют маннит: ферментация маннита производит молочная кислота, понижая pH и окрашивая пластину в желтый цвет. Соль выбрать для галофилы; организмы, которые не могут противостоять высокому содержанию соли, не могут хорошо расти.
- Агар Мюллера-Хинтона содержит отвар говядины, пептон и крахмал, и используется в первую очередь для тестирования чувствительности к антибиотикам. Это может быть в виде кровяной агар.
- Питательный агар обычно используется для выращивания неприхотливых организмов и наблюдения за образованием пигментов. Его безопасно использовать в школьных научных лабораториях, потому что он не растет избирательно. патогенный бактерии.
- Ёноз агар позволяет более быструю бактериологическую диагностику, так как Сальмонелла и Шигелла колонии можно четко и надежно отличить от других Enterobacteriaceae. Урожайность Сальмонелла из образцов стула, полученных при использовании этой среды, выше, чем образцы, полученные с агаром LEIFSON или Сальмонелла – шигелла агар.
- Агар с фенилэтиловым спиртом выбирает для Стафилококк виды при подавлении грамотрицательных бактерий (например, кишечная палочка, Шигелла, Протей, так далее.).
- Агар R2A, неспецифическая среда, имитирующая воду, поэтому используется для анализа воды.
- Триптический (триптиказный) соевый агар (TSA) - это среда общего назначения, получаемая ферментативным расщеплением соя еда и казеин. Часто это основная среда для других типов агара; например, чашки с кровяным агаром изготавливают путем обогащения чашек с TSA кровью. Чашки TSA поддерживают рост многих полужадных бактерий, в том числе некоторых видов Brucella, Коринебактерии, Листерия, Neisseria, и Вибрион.
- Ксилоза -лизин -дезоксихолат агар используется для культивирования табурет образцы и содержит два индикатора. Он разработан для подавления грамположительных бактерий, а рост грамотрицательных бактерий. бациллы рекомендуется. Колонии ферментеров лактозы кажутся желтыми. Он также используется для культивирования Сальмонелла которые могут присутствовать в образце пищи. Наиболее Сальмонелла колонии производят на нем черный центр.
- Цетримидный агар используется для селективного выделения грамотрицательных бактерий. Синегнойная палочка.
- Агар Тинсдейла содержит теллурит калия, который может изолировать Коринебактерии дифтерии.[8]
Грибковые среды
- Агар Сабуро привык к культуре грибы и имеет низкий pH подавляет рост большинства бактерий; он также содержит антибиотик гентамицин специально подавлять рост грамотрицательных бактерий.
- Агар для сена специфичен для выращивания слизевые формы (которые не являются грибами).
- Картофельный агар с декстрозой используется для культивирования некоторых видов грибов.
- Агар с солодовым экстрактом имеет высокое содержание пептона и является кислым. Он в основном используется для изоляции грибковых микроорганизмов.
Моховые СМИ
- Кноп агар используется для аксиально культура протонема и весь мох растения, такие как Physcomitrella patens, а модельный организм.[9]
Дрожжевые среды
- YEPD среда часто используется в качестве общей питательной среды для дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae и грибковые микроорганизмы албиканс
- Среда для споруляции - это среда, используемая, когда должны образоваться споры. Его также можно использовать при работе с грибами или бактериями, в зависимости от того, способен ли штамм образовывать споры.
Смотрите также
Различные специфические типы агара:
Рекомендации
- ^ а б Мэдиган М., Мартинко Дж., Ред. (2005). Биология микроорганизмов Брока (11-е изд.). Прентис Холл. ISBN 0-13-144329-1.
- ^ Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы покрытия». Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. Дои:10.3791/3064. ЧВК 4846335. PMID 22617405. В архиве из оригинала 14 ноября 2017 г.. Получено 3 мая 2018.
- ^ «История чашки с агаром». Новости лаборатории. Архивировано из оригинал 11 февраля 2010 г.. Получено 2010-02-22.
- ^ Барон С; и др., ред. (1996). Медицинская микробиология Барона (4-е изд.). Техасский университет Медицинское отделение. ISBN 0-9631172-1-1. (через книжную полку NCBI).
- ^ Райан К.Дж.; Рэй CG, ред. (2004). Шеррис Медицинская микробиология (4-е изд.). Макгроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9.
- ^ «Индикаторы». Получено 12 июля 2018.
- ^ «Чашки с кровяным агаром и протоколы гемолиза». Архивировано из оригинал на 2012-02-02. Получено 2014-10-28.
- ^ а б Фишер, Брюс; Харви, Ричард П .; Чампе, Памела С. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта). Хагерствон, доктор медицины: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. ISBN 978-0-7817-8215-9.
- ^ Рески, Ральф; Абель, Вольфганг О. (1985). «Индукция бутонизации на хлоронемах и стеблях мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина». Planta. 165 (3): 354–358. Дои:10.1007 / bf00392232. PMID 24241140. S2CID 11363119.
