PGLO - pGLO - Wikipedia

Оставили: Бактерии, трансформированные pGLO при естественном освещении
Правильно:Бактерии, трансформированные pGLO, визуализируются в ультрафиолетовом свете
Оставили: Бактерии, трансформированные pGLO, подвергаются воздействию ампициллина и окружающего света
Правильно:Бактерии, трансформированные pGLO под воздействием ампициллина и ультрафиолета

В pGLO плазмида сконструирована плазмида используется в биотехнология как вектор для создания генетически модифицированные организмы. Плазмида содержит несколько репортерные гены, в первую очередь зеленый флуоресцентный белок (GFP) и ген устойчивости к ампициллину. GFP был выделен из медузы. Aequorea victoria. Потому что он имеет двунаправленную промоутер с геном метаболизма арабиноза, ген GFP экспрессируется в присутствии арабинозы, что заставляет трансгенный организм выражать свою флуоресценцию при УФ-излучение. GFP можно индуцировать в бактериях, содержащих плазмиду pGLO, выращивая их на чашках + арабинозы. pGLO производится Лаборатории Bio-Rad.

Структура

pGLO состоит из трех генов, которые соединены вместе с помощью технологии рекомбинантной ДНК. Вот они:

  • Bla, кодирующий фермент бета-лактамаза придание трансформированным бактериям устойчивости к бета-лактамным антибиотикам (таким как пенициллин семья)
  • araC, промоторная область, которая регулирует экспрессию GFP (в частности, ген GFP будет экспрессироваться только в присутствии арабиноза )
  • GFP, зеленый флуоресцентный белок, который дает зеленое свечение, если клетки производят этот тип белка.

Как и большинство других кольцевых плазмид, плазмида pGLO содержит ориджин (ori), который представляет собой область плазмиды, в которой будет происходить репликация. Плазмида pGLO стала известной благодаря исследователям в Франция кто использовал его для получения зеленого флуоресцентного кролик названный Альба.

Другие особенности pGLO, как и большинство других плазмид, включают: селектируемый маркер Ori (начало репликации ) и MCS (сайт множественного клонирования ), расположенный на конце гена GFP. Плазмида 5371 пар оснований длинный. В суперскрученный форме, он работает на агарозный гель в диапазоне 4200–4500.[1][2][3]

Открытие GFP

Ген GFP впервые обнаружил Осаму Шимомура.[4] и его команда в 1962 году во время изучения медуз Aequorea victoria у которых есть кольцо синего света под зонтиком. Шимомура и его команда выделили белок экворин от тысяч медуз до тех пор, пока они не соберут достаточно для полного анализа белка. Именно благодаря изучению эккорина Шимомура обнаружил небольшое количество GFP, который светится зеленым, когда эккорин излучает синий свет. После успешного открытия того, как GFP работает с эккорином у медуз, он отложил его для изучения биолюминесценции у других организмов.

Пример мутанта GFP, который светится разными цветами, чтобы нарисовать изображение пляжа

В 1994 году Марти Чалфи[4] и его команда смогли успешно создать бактерии и круглых червей, которые экспрессируют белок GFP. Вскоре после этого Роджер Цзянь[5] и его команда смогли создать мутантный GFP, который может излучать разные цвета, а не только зеленый.

Трое ученых получили Нобелевскую премию по химии за 2008 год.[6] за открытие и разработку зеленого флуоресцентного белка GFP.


Рекомендации

  1. ^ «Белковый электрофорез GFP от Biotechnology Explorer ™: расширение набора для бактериальной трансформации pGLO ™» (PDF). Архивировано из оригинал (PDF) 24 февраля 2012 г.
  2. ^ Eichbaum QG, Iyer R, Raveh DP, Mathieu C, Ezekowitz RA (июнь 1994). «Ограничение чувствительности к гамма-интерферону и базовой экспрессии миелоидного гена Fc гамма R1b человека опосредуется функциональным сайтом PU.1 и консенсусом инициатора транскрипции». Журнал экспериментальной медицины. 179 (6): 1985–96. Дои:10.1084 / jem.179.6.1985. ЧВК  2191524. PMID  8195721.
  3. ^ Эйхбаум К., Хени Д., Раве Д., Чанг М., Дэвидсон М., Эпштейн Дж., Эзековиц Р.А. (ноябрь 1997 г.). «Промотор рецептора маннозы макрофагов мыши регулируется факторами транскрипции PU.1 и SP1». Кровь. 90 (10): 4135–43. Дои:10.1182 / кровь.V90.10.4135. PMID  9354684. Архивировано из оригинал 21 апреля 2005 г.
  4. ^ а б Ферри, Джорджина (2018). «Осаму Шимомура». Природа. 563: 627 - через Гейл в контексте: наука.
  5. ^ «История зеленого флуоресцентного белка». Conncoll.edu.
  6. ^ «Нобелевская премия по химии 2008 г.». NobelPrize.org. Получено 2020-10-19.