Калькофтор-белый - Calcofluor-white - Wikipedia

Калькофтор-белый или CFW представляет собой флуоресцентный синий краситель, который используется для связывания с полисахаридными полимерами амебных цист. Он функционирует, будучи способным связываться с полисахаридами 1-3 бета и 1-4 бета на хитине и целлюлозе, которые присутствуют в клеточных стенках грибов, растений и водорослей.

Флуоресцентное окрашивание дрожжей калькофлюоровым белком. Стенки дрожжей окрашены в ярко-синий цвет.

В биология растительной клетки исследования, его используют для окрашивания клеточные стенки обоих водоросли и высшие растения.[1][2]
Это также полезно в лекарство и биологии животных для идентификации грибы в ткань,[1][3][4] (он связывается с хитином в клеточных стенках грибов).

использование

Лекарство

CFW можно использовать как в клинической микологии, так и в паразитологии. Свободноживущие амебы у окулярных видов могут иметь кисты, которые хорошо видны на пятне. Их видели на станциях для промывания глаз в лабораториях.[5] CFW можно использовать с окраской Папаниколау, чтобы усилить реакцию дрожжей на мазки Папаниколау.[6]

Исследование

В исследованиях калькофлуор-белый также используется для окрашивания шрамов почек дрожжевых клеток, потому что шрамы почек имеют более высокое содержание хитина, который окрашивает их больше, чем остальную клеточную мембрану. Благодаря этому красителю можно подсчитать рубцы почек, что является показателем возраста клетки. Он показывает похожие образцы окрашивания, как и Агглютинин зародышей пшеницы (WGA). Это особенно полезно для идентификации Мукор и возбудители из зигомикоз.Калькофлюор-белый может использоваться для окрашивания текальных пластин в бронированных динофлагелляты.[7]Калькофлуор также используется в качестве красителя для одежды белого цвета, что дает характерный внешний вид при «черном освещении».

Текстиль

CFW - это краситель для осветления тканей. Сначала он водорастворим и бесцветен. Он обладает оптическим осветляющим эффектом, который использовался с 1940-х годов для придания более белого цвета текстилю. Его также добавляют в средства для стирки в коммерческих целях в качестве осветлителя.[8]

Флуоресценция

Поперечное сечение орлиного папоротника показывает ярко-зеленую и ярко-синюю флуоресценцию, наблюдаемую при CFW.

Водные растворы калькофтор-белого имеют спектр поглощения от 300 до 412 нм с максимумом при 347 нм. Пик флуоресценция лучше всего происходит с ультрафиолетовый свет, но фиолетовый / сине-фиолетовый также дает отличные результаты флуоресценции. Калькофлуор-Уайт - это флуоресцентный краситель, что означает возбуждение и длина волны излучения, которая отличается друг от друга. Длина волны возбуждения составляет 380 нм, а длина волны излучения - 475 нм. Флуоресценцию лучше всего увидеть в ультрафиолетовом свете, но ее также можно увидеть в фиолетовом или сине-фиолетовом.

Грибы имеют тенденцию отображать ярко-зеленый цвет в УФ / фиолетовом / фиолетово-синем свете из-за барьерных фильтров, используемых в микроскопии для флуоресценции. Calcofluor white должен тщательно интерпретировать окрашивание, поскольку некоторые неспецифические реакции могут сделать фон флуоресцентным желто-зеленым цветом. Это можно уменьшить, глядя на ячейки в синем свете или с помощью других фильтров, чтобы увидеть наилучшее изображение. Эванс синий является контрастным красителем для калькофлуора белого, поскольку он может помочь уменьшить фоновые ткани и клетки с синим светом.[9]

Сравнительные исследования

В сравнительном исследовании КОН, Calcofluor-White и грибковые культуры для диагностики грибковых заболеваний. Онихомикоз CFW считается наиболее чувствительным методом выявления инфекции у людей. Исследование показало, что из 150 пациентов CFW показал положительный результат у 95 из них. В исследовании также были рассмотрены ключевые преимущества использования красителя Calcofluor-White по сравнению с KOH. Обсуждается, что CFW требует быстрого просмотра, поскольку это можно увидеть на объективах с низким энергопотреблением и может быть выполнено в течение минуты, в то время как KOH требует около 3-4 минут для каждого слайда. Это более быстрый и более чувствительный метод проверки, чем КОН, а фоновый материал можно отобрать с помощью CFC.[10]

При исследовании методов диагностики микозов, грибковой инфекции у людей, CFW сравнивали с KOH и Chicago Sky Blue 6B. CFW показал положительный результат тестирования в 53,4% случаев с подозрением на микоз, в то время как Chicago Sky Blue 6B показал точность 55%. Исследование показало, что CFW менее эффективен в быстром обнаружении по сравнению с Chicago Sky Blue 6B, но это эффективный способ обнаружения грибковой инфекции.[6]

Исследование, посвященное обнаружению Candida при раковых или предраковых поражениях с использованием CFW с флуоресцентной микроскопией. В ходе исследования хотелось увидеть эффективность Calcofluor-White против грибковых инфекций, которые могут вызвать смерть или серьезные травмы у пациентов с ослабленным иммунитетом. Он также исследовал чувствительность красителя по сравнению с окрашиванием по Граму и окрашиванием PAS. Исследование показало, что это быстрый и простой способ диагностики в цитопатологии и гистопатологии, но он был относительно дорогим. Исследование также показало, что для эффективного окрашивания не требуется специальных методов. Краситель также не мешает окрашиванию по PAS или Граму. За цитология, Pap-CFW дал положительный ответ 50 раз из 135, а для гистопатология, он дал положительный ответ 43 из 135 только для окрашивания CFW. Исследование показало, что окрашивание улучшилось при сочетании Пап и CFW. Результаты показали, что краситель был невероятно эффективным с точки зрения быстрой диагностики и эффективности, что делало его лучше по сравнению с грамположительными и PAS в этом конкретном исследовании.[11] В целом, окраска имеет ключевые преимущества для исследовательских и диагностических целей, но она стоит немного дороже и не может быть такой точной для определенных видов.

Проблемы с окрашиванием калькофлуором-белым

Были исследования, показывающие, что CFW плохо флуоресцирует с Coccidioides immitis несмотря на то, что это грибок. Histoplasma capsulatum и Криптококк neoformans также имеют тенденцию иметь проблемы с отображением флуоресценции CFW. В другом отчете Pneumocystis carinii в биоптатах легкого их нужно было окрашивать при комнатной температуре в течение пяти минут, а затем при 65 ° C в течение пяти минут, чтобы лучше всего увидеть флуоресценцию. Флуоресценция темно-пигментированных грибов может привести к ошибочным результатам, поскольку зависит от того, насколько хорошо пигментированы грибы и насколько хорошо действует окраска.[5]

Рекомендации

  1. ^ а б Herth, W .; Э. Шнепф (1980). «Флуорохром, калькофлуоровый белый, связывает ориентированные со структурными полисахаридными фибриллами». Протоплазма. Springer. 105 (1–2): 129–133. Дои:10.1007 / BF01279855. ISSN  0033-183X. S2CID  37459059.
  2. ^ Бидхенди, AJ; Chebli, Y; Гайтманн, А (май 2020 г.). «Визуализация флуоресценции целлюлозы и пектина в первичной клеточной стенке растений». Журнал микроскопии. 278 (3): 164–181. Дои:10.1111 / jmi.12895. PMID  32270489. S2CID  215619998.
  3. ^ Hoch, H.C .; CD. Гальвани; Д. Х. Саровски; J.N. Тернер (2005). «Два новых флуоресцентных красителя, применимых для визуализации клеточных стенок грибов». Микология. 97 (3): 580–588. Дои:10.3852 / mycologia.97.3.580. ISSN  0027-5514. PMID  16392246.
  4. ^ Бернс, Эдвард Р .; Wittner M .; Фасковиц Ф. (5 апреля 2005 г.). «Метод обнаружения хитинсодержащих организмов - Патент 6875421». Получено 10 ноября 2010.
  5. ^ а б Харрингтон, Брайан Дж .; Хейджейдж, Джордж (май 2003 г.). «Калькофлуор Уайт: Обзор его использования и применения в клинической микологии и паразитологии». Департамент общественного здравоохранения и Департамент микробиологии и иммунологии Медицинского колледжа Огайо, Департамент патологии, Объединенные лаборатории Мерси и Департамент микробиологии и иммунологии Медицинского колледжа Огайо, Толедо, Огайо. Цитировать журнал требует | журнал = (помощь)
  6. ^ а б Афшар, Парване; Лариджани, Лале Вахеди; Руханизаде, Хамед (2012–2018 гг.). «Сравнение традиционных экспресс-методов диагностики поверхностных и кожных микозов на основе окрашивания KOH, Chicago sky blue 6B и калькофлуорового белого». Иранский журнал микробиологии. 10 (6): 433–440. ISSN  2008-3289. ЧВК  6414738. PMID  30873272.
  7. ^ Fritz, L. и Triemer, R. 1985. Быстрая и простая техника с использованием калькофлюорового белого M2R для визуализации пластинок динофлагеллят текальной области. Journal of Phycology, 21: 662-664.
  8. ^ Hoch, H.C .; Galvani, C.D .; Szarowski, D. H .; Тернер, Дж. Н. (2005-05-01). «Два новых флуоресцентных красителя, применимых для визуализации клеточных стенок грибов». Микология. 97 (3): 580–588. Дои:10.1080/15572536.2006.11832788. ISSN  0027-5514. PMID  16392246. S2CID  203428057.
  9. ^ Биологические препараты, Daylnn (сентябрь 2005 г.). «Калькофлуор белое пятно» (PDF). Dalynn Biologicals. Каталожный № SC15.
  10. ^ Дасс, С. Маник; Э. В. Винаярадж; Пававни, К .; Паллам, Айшвария; Рао, М. Шринивас (2015). «Сравнение KOH, Calcofluor White и грибковой культуры для диагностики грибкового онихомикоза в городской клинической больнице, Хайдарабад». Индийский журнал микробиологических исследований. 2 (3): 148–153. Дои:10.5958/2394-5478.2015.00004.7.
  11. ^ Бхавасар, Рашми С.К .; Годже, Сантош Кумар; Такалкар, Анант Арунрао; Ganvir, Sindhu M .; Hazarey, Vinay K .; Госави, Сучитра Р. (2010). «Обнаружение Candida Calcofluor White». Acta Cytologica. 54 (5): 679–684. Дои:10.1159/000325232. ISSN  0001-5547. PMID  20968155. S2CID  3359124.

внешняя ссылка