Дальневосточный блот - Far-western blot

В Дальний вестерн, или же Дальний вестерн-блоттинг, представляет собой молекулярно-биологический метод, основанный на технике вестерн-блот для обнаружения белок-белкового взаимодействия in vitro.[1][2] Тогда как западный пятно использует зонд на основе антител для обнаружения представляющего интерес белка, дальний вестерн-блот использует зонд, не являющийся антителом, который может связывать интересующий белок. Таким образом, в то время как вестерн-блоттинг используется для обнаружения определенных белков, дальний вестерн-блоттинг используется для обнаружения взаимодействий белок / белок.

Метод

В обычном вестерн-блоте гель-электрофорез используется для отделения белков от образца; затем эти белки переносятся на мембрану на стадии «блоттинга». Затем с помощью вестерн-блоттинга идентифицируют определенные белки с помощью антитело зонд.

Фар-вестерн-блот использует белки, не являющиеся антителами, для исследования интересующих белков на блоте. Таким образом могут быть идентифицированы партнеры связывания зонда (или блотированного) белка. Зондовый белок часто производится в Кишечная палочка используя клонирование выражения вектор.

Затем зондовый белок можно визуализировать обычными методами - он может быть помечен радиоактивной меткой; он может нести конкретный тег сходства подобно Его или же ФЛАГ для каких антител существуют; или может быть антитело, специфичное к белку (к белку зонда).

Поскольку экстракты клеток обычно полностью денатурируются путем кипячения в моющем средстве перед гель-электрофорез, этот подход наиболее полезен для обнаружения взаимодействий, которые не требуют нативной складчатой ​​структуры интересующего белка.

Рекомендации

  1. ^ Холл, Рэнди А. (2004). «Изучение белок-белковых взаимодействий с помощью наложения блотов или дальнего вестерн-блоттинга». Белок-белковые взаимодействия. Методы молекулярной биологии. 261. С. 167–174. CiteSeerX  10.1.1.380.553. Дои:10.1385/1-59259-762-9:167. ISBN  978-1-59259-762-8. PMID  15064457.
  2. ^ Мачида, Казуя; Майер, Брюс Дж. (2009). «Обнаружение белок-белковых взаимодействий методом дальневосточного блоттинга». Блоттинг и обнаружение белков. Методы молекулярной биологии. 536. С. 313–329. Дои:10.1007/978-1-59745-542-8_34. ISBN  978-1-934115-73-2. ISSN  1064-3745. PMID  19378071.

внешняя ссылка