Клякса (биология) - Blot (biology)

А пятно, в молекулярная биология и генетика, это метод передачи белки, ДНК или же РНК на носитель (например, нитроцеллюлоза, поливинилиденфторид или же нейлон мембрана). Во многих случаях это делается после гель-электрофорез, перенося молекулы из геля на промокательная мембрана, а в других случаях добавление образцов непосредственно на мембрану. После блоттинга перенесенные белки, ДНК или РНК затем визуализируются путем окрашивания красителем (например, окрашивания белков серебром), авторадиографический визуализация радиоактивно меченый молекулы (выполняется перед блоттингом) или специфическое мечение некоторых белков или нуклеиновые кислоты. Последнее делается с помощью антитела или же зонды гибридизации которые связываются только с некоторыми молекулами блота и имеют фермент присоединился к ним. После надлежащей промывки эта ферментативная активность (и, следовательно, молекулы, которые мы ищем в блоте) визуализируется путем инкубации с надлежащей реактивностью, в результате чего на блоте появляется окрашенный осадок или хемилюминесцентный реакция, которая фиксируется фотографическим фильм.

Саузерн-блот

А Саузерн-блот это метод, обычно используемый в молекулярной биологии для обнаружения специфических ДНК последовательность в образцах ДНК. Саузерн-блоттинг объединяет перенос фрагментов ДНК, разделенных электрофорезом, на мембрану фильтра и последующее обнаружение фрагментов с помощью гибридизации зонда.[1]

Вестерн-блоттинг

А вестерн-блот используется для обнаружения конкретных белков в сложных образцах. Белки сначала разделяют по размеру с помощью электрофореза, а затем переносят в соответствующий матрица для блоттинга (обычно поливинилиденфторид или же нитроцеллюлоза ) и последующее обнаружение антителами.

Дальневосточный блот

Похоже на вестерн-блот, то Дальний вестерн использует белок-белковые взаимодействия для обнаружения присутствия определенного белка, иммобилизованного на матрице для блоттинга. Затем антитела используются для обнаружения присутствия протеин-белкового комплекса, что делает фар-вестерн-блот частным случаем вестерн-блоттинга.

Юго-западное пятно

А юго-западное пятно основан на Саузерн-блот и используется для идентификации и характеристики ДНК-связывающих белков по их способности связываться со специфическими олигонуклеотидными зондами.[2] Белки разделяют с помощью гель-электрофореза и затем переносят на нитроцеллюлозные мембраны, аналогично другим типам блоттинга.

Восточная клякса

В восточная клякса используется для обнаружения специфических посттрансляционных модификаций белков. Белки разделяют с помощью гель-электрофореза перед переносом в матрицу для блоттинга, после чего выявляются посттрансляционные модификации с помощью конкретных субстратов (холерного токсина, конканавалина, фосфомолибдата и т. Д.) Или антител.[3]

Дальневосточная клякса

В дальневосточная клякса предназначен для обнаружения липид-связанных олигосахариды. Высокоэффективная тонкослойная хроматография сначала используется для разделения липидов по физическим и химическим характеристикам, затем переносится в матрицу для блоттинга до того, как олигосахариды будут обнаружены специфическим связывающим белком (т.е. антителами или лектинами).

Нозерн-блот

В северное пятно предназначен для обнаружения конкретных последовательностей РНК в сложных образцах. Нозерн-блоттинг сначала разделяет образцы по размеру с помощью гель-электрофореза, прежде чем они будут перенесены в матрицу для блоттинга и обнаружены мечеными зондами РНК.

Обратное северное пятно

В обратный северный блот отличается от Нозерн-блоттинга и Саузерн-блоттинга тем, что ДНК сначала иммобилизуют на матрице для блоттинга, а специфические последовательности выявляются с помощью меченых РНК-зондов.

Точечный блот

А точечный блот является частным случаем любого из вышеуказанных блотов, когда аналит добавляется непосредственно в матрицу для блоттинга (и отображается как «точка»), в отличие от разделения образца электрофорезом перед блоттингом.

Список клякс

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Towbin, Staehelin T, Gordon J, et al. (1979). «Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: процедура и некоторые применения». PNAS. 76 (9): 4350–4. Bibcode:1979PNAS ... 76.4350T. Дои:10.1073 / пнас.76.9.4350. ЧВК  411572. PMID  388439.
  2. ^ Bowen B, Steinberg J, Laemmli UK, Weintraub H (январь 1980 г.). «Обнаружение ДНК-связывающих белков с помощью белкового блоттинга». Нуклеиновые кислоты Res. 8 (1): 1–20. Дои:10.1093 / nar / 8.1.1. ЧВК  327239. PMID  6243775.
  3. ^ Thomas, Thirumalapura N, Crossley EC, Ismail N, Walker DH, et al. (2009). «Модификации антигенного белка у Эрлихии». Иммунология паразитов. 31 (6): 296–303. Дои:10.1111 / j.1365-3024.2009.01099.x. ЧВК  2731653. PMID  19493209.