Анализ белка Лоури - Lowry protein assay

В Анализ белка Лоури это биохимический проба для определения общего уровня белок в решение. Общая концентрация белка отображается изменением цвета раствора образца пропорционально концентрации белка, которую затем можно измерить с помощью колориметрические методы. Назван в честь биохимика. Оливер Х. Лоури кто разработал реагент в 1940-е гг. Его статья 1951 года с описанием этой техники - самая цитируемая статья в научной литературе: ее цитировали более 300 000 раз.[1][2][3]

Механизм

Метод сочетает в себе реакции ионов меди с пептидные связи под щелочной условия ( Биуретовый тест ) с окисление ароматических белок остатки. Метод Лоури основан на реакции Cu+, образованный окислением пептидных связей, с Реагент Фолина-Чокальтеу (смесь фосфорновольфрамовая кислота и фосфорномолибденовая кислота в реакции Фолина – Чокальте). Механизм реакции не совсем понятен, но включает сокращение реагента Фолина – Чокальте и окисление из ароматный остатки (в основном триптофан, также тирозин ). Эксперименты показали, что цистеин также реагирует с реагентом. Следовательно, остатки цистеина в белке, вероятно, также вносят вклад в оптическую плотность, наблюдаемую в анализе Лоури.[4] Результатом этой реакции является ярко-синяя молекула, известная как гетерополимолибденовый синий.[5] Концентрация восстановленного реагента Фолина (гетерополимолибденовый синий) измеряется с помощью поглощение при 660 нм.[6] В результате общая концентрация белка в образце может быть выведена из концентрации остатков триптофана и тирозина, которые восстанавливают реагент Фолина-Чокальтеу.

Метод был впервые предложен Лоури в 1951 году. Анализ бицинхониновой кислоты и Анализ Хартри – Лоури являются последующими модификациями исходной процедуры Лоури.

Смотрите также

использованная литература

  1. ^ Ван Норден, Р.; Maher, B .; Нуццо, Р. (2014). «100 лучших работ». Природа. 514 (7524): 550–553. Bibcode:2014Натура.514..550В. Дои:10.1038 / 514550a. PMID  25355343.
  2. ^ Kresge, N .; Simoni, R.D .; Хилл, Р. Л. (2005). "Самая цитируемая статья в истории публикаций: определение белков Оливером Х. Лоури". Журнал биологической химии. 280 (28): e25.
  3. ^ Гарфилд, Э. (1990). "Самые цитируемые статьи всех времен, SCI 1945-1988 гг. Часть 1А. В SCI 100 лучших - Будет ли когда-нибудь уничтожен метод Лоури? " (PDF). Текущее содержание. 7: 3–14.
  4. ^ Everette, J.D .; Bryant, Q.M .; Грин, А. М .; Abbey, Y.A .; Wangila, G.W .; Уокер, Р. Б. (28 июля 2010 г.). «Тщательное исследование реакционной способности различных классов соединений по отношению к реагенту Фолин-Чокальтеу». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии. 58 (14): 8139–8144. Дои:10.1021 / jf1005935. ЧВК  4075968. PMID  20583841.
  5. ^ Нинфа, Александр Дж. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии. Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, INC. Стр. 112. ISBN  978-0-470-08766-4.
  6. ^ Lowry, O.H .; Rosebrough, N.J .; Farr, A. L .; Рэндалл, Р. Дж. (1951). «Измерение содержания белка с фенольным реагентом Folin» (PDF). Журнал биологической химии. 193 (1): 265–75. PMID  14907713.
  • Уокер, Дж. М. (2002). Справочник по белковым протоколам. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press.

внешние ссылки