NeuN - NeuN - Wikipedia

Гиппокамп крысы окрашивали антителом к ​​NeuN (зеленый), основному белку миелина (красный) и ДНК (синий). Антитела и изображение любезно предоставлено EnCor Biotechnology Inc.
Окрашивание антител на NeuN / Fox-3 у взрослой крысы мозжечок в зеленом. Антитело Fox-3 / NeuN связывается с малым гранулярная клетка мозжечка нейроны, образующие заметный слой. Напротив, антитело к близкому родственнику Fox-3 / NeuN, Fox-2, показано красным. Пятна на антитела Fox-2 Нейроны Пуркинье и Клетка Гольджи которые не распознаются антителом NeuN / Fox-3. Клетки Пуркинье образуют слой над гораздо более многочисленными гранулярными клетками, а случайные клетки Гольджи, также положительные по Fox-2, но отрицательные по NeuN / Fox-3, можно увидеть в слое гранулярных клеток. ДНК показана синим цветом. Антитела и изображение любезно предоставлено EnCor Biotechnology Inc.

NeuN (Fox-3, Rbfox3 или гексарибонуклеотид-связывающий белок-3), белок, который является гомологом белкового продукта определяющего пол гена в Caenorhabditis elegans, это нейронный ядерный антиген который обычно используется как биомаркер за нейроны.

История

NeuN был впервые описан в 1992 г. Mullen et al., Которые подняли ряд моноклональные антитела к мышиным антигенам с первоначальной целью найти специфичные для вида мыши иммунологические маркеры для использования в экспериментах по трансплантации.[1] В случае если они изолировали гибридома линия, которая продуцировала моноклональное антитело под названием mAb A60, которое, как было доказано, связывает антиген, экспрессируемый только в ядрах нейронов, и в меньшей степени цитоплазма нейронных клеток, которые, по-видимому, работают на всех позвоночных. Поэтому этот антиген был известен как NeuN, что означает «нейрональные ядра», хотя в течение следующих 17 лет было неизвестно, с чем связывается антитело A60. В 2009 году Kim et al. использовал протеомный методы, чтобы показать, что NeuN соответствует белку, известному как Fox-3, также известному как Rbfox3, гомологу Fox-1 у млекопитающих, белка, первоначально идентифицированного в результате генетических исследований нематода червь C. elegans.[2]

Структура

Вестерн-блоттинг показывает, что mAb A60 связывается с двумя полосами кажущейся молекулярный вес ~ 46 кДа и ~ 48 кДа на SDS-СТРАНИЦА. Эти две полосы созданы из одного гена Fox-3 альтернативное сращивание. Фактически существует четыре белковых продукта из гена Fox-3 в результате присутствия или отсутствия двух аминокислотных последовательностей, кодируемых двумя экзонами.[3] Включение или отсутствие 47 аминокислот из экзона 12 приводит к полосам ~ 46 кДа и ~ 48 кДа, наблюдаемым на гелях SDS-PAGE, в то время как включение или отсутствие 14 аминокислот из экзона 15 дает две формы, которые слишком похожи по размеру молекул для можно различить на типичных гелях SDS-PAGE. Интересно, что белок, кодируемый экзоном 15, добавляет C-концевой тип PY. последовательность ядерной локализации, что предположительно объясняет, почему белок NeuN / Fox-3 может быть как ядерным, так и, в некоторых типах клеток, также цитоплазматическим. Все формы экспрессируются только в нейронах, поэтому антитело mAb A60 и другие подобные антитела к NeuN / Fox-3 стали очень широко использоваться в качестве надежных маркеров нейронов.

Используется в качестве нейронального биомаркера

Антитела NeuN широко используются для маркировки нейронов, несмотря на некоторые недостатки, и поиск в Pubmed в сентябре 2018 года с использованием ключевого слова NeuN дал 3060 совпадений.[4] Некоторые типы нейрональных клеток не распознаются антителами NeuN, например мозжечковые Клетки Пуркинье и Клетки Гольджи, обонятельные Митральные клетки, сетчатка фоторецепторы и гамма мотонейроны. Однако подавляющее большинство нейронов являются строго NeuN-положительными, и иммунореактивность NeuN широко используется для идентификации нейронов в тканевой культуре и на срезах, а также для измерения соотношения нейрон / глия в областях мозга.[5] Иммунореактивность NeuN становится очевидной по мере созревания нейронов, обычно после того, как они подавили экспрессию Даблкортин, маркер, обнаруживаемый на самых ранних стадиях развития нейронов.

Феминизирующий локус на X Homologue

Fox-3 является одним из семейства гомологов белка Fox-1 у млекопитающих, первоначально обнаруженного в нематода червь C. elegans как белковый продукт гена, участвующего в определении пола.[6] Фокс - это, по сути, аббревиатура от «Феминизирующий локус на X». Геном млекопитающих содержит три гена, гомологичных C. elegans Лиса-1, называемая Фокс-1, Лиса-2 и Фокс-3. Все белки Fox имеют размер около 46 кДа и каждый включает центральную высококонсервативную RRM из ~ 70 аминокислот или Мотив распознавания РНК. RRM-домены - одни из самых распространенных в человеческий геном и содержатся во многих белках, которые связывают РНК молекулы. NeuN / Fox-3 и другие белки Fox участвуют в регуляции мРНК сплайсинг и связывание определенных последовательностей РНК. Обзор семейства белков Fox см. В этой ссылке.[7] Альтернативное название Fox-3 - это гексарибонуклеотид-связывающий белок 3, поскольку Fox-3, как Fox-2 и Fox-1, связывается с гексарибонуклеотидом UGCAUG, и это связывание участвует в регуляции сплайсинга мРНК.

Рекомендации

По состоянию на 15 июня 2011 г. эта статья полностью или частично основана на EnCor Biotechnology Inc.. Владелец авторских прав лицензировал контент таким образом, чтобы разрешить повторное использование в соответствии с CC BY-SA 3.0 и GFDL. Все соответствующие условия должны быть соблюдены. Исходный текст был в «Моноклональные антитела к Fox3 / NeuN»

  1. ^ Mullen, RJ; Бак, CR; Смит, AM (1992). «NeuN, нейрональный специфический ядерный белок у позвоночных». Разработка. 116 (1): 201–11. PMID  1483388.
  2. ^ Kim, KK; Адельштейн, RS; Кавамото, S (2009). «Идентификация ядер нейронов (NeuN) как Fox-3, нового члена семейства генов Fox-1 факторов сплайсинга». Журнал биологической химии. 284 (45): 31052–61. Дои:10.1074 / jbc.M109.052969. ЧВК  2781505. PMID  19713214.
  3. ^ Земснаряд, БК; Дженсен, КБ (2011). «Ядерные и цитоплазматические изоформы NeuN / Rbfox3 по-разному регулируют альтернативный сплайсинг и нонсенс-опосредованный распад Rbfox2». PLOS One. 6 (6): e21585. Bibcode:2011PLoSO ... 621585D. Дои:10.1371 / journal.pone.0021585. ЧВК  3126832. PMID  21747913.
  4. ^ «НойН - ПабМед - НЦБИ».
  5. ^ Herculano-Houzel, S; Пост, Р (2005). «Изотропный фракционатор: простой и быстрый метод количественной оценки общего числа клеток и нейронов в головном мозге». Журнал неврологии. 25 (10): 2518–21. Дои:10.1523 / JNEUROSCI.4526-04.2005. ЧВК  6725175. PMID  15758160.
  6. ^ Ходжкин, Дж; Зеллан, JD; Альбертсон, Д.Г. (1994). «Идентификация кандидата в первичный локус определения пола, fox-1, на X-хромосоме Caenorhabditis elegans». Разработка. 120 (12): 3681–9. PMID  7821230.
  7. ^ Андервуд Дж. Г., Бутц П. Л., Догерти Дж. Д., Стоилов П., Блэк Д. Л. (2005). «Гомологи белка Fox-1 Caenorhabditis elegans являются регуляторами сплайсинга нейронов у млекопитающих». Мол. Клетка. Биол. 25 (22): 10005–10016. Дои:10.1128 / MCB.25.22.10005-10016.2005. ЧВК  1280273. PMID  16260614.