STED-микроскопия - STED microscopy

Микроскопия с вынужденным истощением выбросов (STED) обеспечивает значительное улучшение разрешения по сравнению с тем, что возможно с Конфокальная микроскопия.

Истощение вынужденных выбросов (STED) микроскопия это одна из техник, которые составляют микроскопия сверхвысокого разрешения. Это создает сверхвысокое разрешение изображения путем выборочной деактивации флуорофоры, сводя к минимуму площадь освещения в фокусе и, таким образом, повышая достижимое разрешение для данной системы.[1] Он был разработан Стефан В. Ад и Ян Вихманн в 1994 г.,[2] и был впервые экспериментально продемонстрирован Адом и Томасом Кларом в 1999 году.[3] Ад был награжден Нобелевская премия по химии в 2014 году на его развитие. В 1986 году В.А. Охонин[4] (Институт биофизики СО АН СССР, Красноярск) запатентовал идею СТЭД.[5] Этот патент, возможно, был неизвестен Hell and Wichmann в 1994 году.

STED-микроскопия - один из нескольких видов микроскопия сверхвысокого разрешения методы, которые были недавно разработаны, чтобы обойти дифракционный предел световой микроскопии для увеличения разрешения. STED - это детерминированный функциональный метод, который использует нелинейный отклик флуорофоров, обычно используемых для маркировки биологических образцов, для достижения улучшения разрешения, то есть STED позволяет получать изображения с разрешением ниже дифракционного предела. Это отличается от стохастических функциональных методов, таких как Фотоактивированная локализационная микроскопия (ЛАДОНИ) и микроскопия стохастической оптической реконструкции (STORM), поскольку эти методы используют математические модели для восстановления субдифракционного предела из многих наборов дифракционно ограниченных изображений.

Фон

Формула Эрнста Аббе для дифракционного предела, высеченная в камне у памятника в Йена.
Диаграмма Яблонского, показывающая красное смещение стимулированного фотона. Это красное смещение позволяет игнорировать стимулированный фотон.
Схема устройства СТЭД. Конструкция с двойным лазером позволяет одновременно использовать возбуждение и вынужденное излучение для STED.

В традиционной микроскопии разрешение, которое можно получить, составляет ограничен дифракцией света. Эрнст Аббе разработал уравнение для описания этого предела. Уравнение:

где D - дифракционный предел, λ - длина волны света, NA - числовая апертура, или показатель преломления среды, умноженный на синус угла падения. n описывает показатель преломления образца, α измеряет телесный полуугол, под которым свет собирается объективом, λ - длина волны света, используемого для возбуждения образца, а NA - числовая апертура. Для получения высокого разрешения (т.е. малых значений d) оптимальны короткие длины волн и высокие значения числовой апертуры (NA = n sinα). [6]Этот дифракционный предел является стандартом, по которому измеряются все методы сверхвысокого разрешения. Поскольку STED выборочно деактивирует флуоресценцию, он может достигать разрешения лучше, чем традиционная конфокальная микроскопия. Нормальная флуоресценция возникает при возбуждении электрона из основного состояния в возбужденное электронное состояние с другим фундаментальным уровнем энергии (S0 переходит в S1), который после релаксации обратно в основное состояние (S1) излучает фотон, переходя из S1 в колебательный уровень энергии на S0. STED прерывает этот процесс до того, как фотон высвобождается. Возбужденный электрон вынужден релаксировать в более высокое колебательное состояние, чем мог бы войти переход флуоресценции, в результате чего высвобождаемый фотон смещается в красную область, как показано на изображении справа.[7] Поскольку электрон переходит в более высокое колебательное состояние, разность энергий двух состояний ниже нормальной разности флуоресценции. Это уменьшение энергии увеличивает длину волны и заставляет фотон смещаться дальше в красный конец спектра. Этот сдвиг различает два типа фотонов и позволяет игнорировать стимулированный фотон.

Чтобы вызвать это альтернативное излучение, падающий фотон должен столкнуться с флуорофором. Эта необходимость быть пораженным падающим фотоном имеет два значения для STED. Во-первых, количество падающих фотонов напрямую влияет на эффективность этого излучения, а, во-вторых, при достаточно большом количестве фотонов флуоресценция может быть полностью подавлена.[8] Чтобы получить большое количество падающих фотонов, необходимое для подавления флуоресценции, лазер, используемый для генерации фотонов, должен иметь высокую интенсивность. К сожалению, этот лазер высокой интенсивности может привести к проблеме фотообесцвечивание флуорофор. Фотообесцвечивание - это название уничтожения флуорофоров светом высокой интенсивности.

Процесс

Сравнение конфокальной микроскопии и STED-микроскопии. Это показывает улучшенное разрешение STED-микроскопии по сравнению с традиционными методами.
Пятно возбуждения (2D, слева), пятно снятия возбуждения в форме пончика (в центре) и оставшаяся область, допускающая флуоресценцию (справа).

Функция STED заключается в уменьшении флуоресценции в определенных областях образца, оставляя центральное фокусное пятно активным для излучения флуоресценции. Эта фокусная область может быть изменена путем изменения свойств плоскости зрачка линзы объектива.[9][10][11] Наиболее распространенным ранним примером этих дифракционных оптических элементов или ДОЭ является тор форма, используемая в двухмерном боковом ограничении, показана ниже. Красная зона истощена, а зеленая точка остается активной. Этот ДОЭ генерируется круговая поляризация истощающего лазера в сочетании с оптический вихрь. Поперечное разрешение этого DOE обычно составляет от 30 до 80 нм. Однако сообщалось о значениях вплоть до 2,4 нм.[12] При использовании различных ДОЭ было продемонстрировано осевое разрешение порядка 100 нм.[13] Модифицированное уравнение Аббе описывает это субдифракционное разрешение как:

Где это показатель преломления среды, это внутрирезонаторный интенсивность и это интенсивность насыщения. Где - коэффициент насыщения, выражающий отношение применяемой (максимальной) интенсивности STED к интенсивности насыщения, . [14]

Чтобы оптимизировать эффективность STED, деструктивная интерференция в центре фокального пятна должна быть как можно ближе к идеальной. Это накладывает определенные ограничения на оптику, которую можно использовать.

Красители

На начальном этапе разработки STED количество красителей, которые можно было использовать в процессе, было очень ограниченным. Родамин B был назван в первом теоретическом описании STED.[2] В результате первые использованные красители имели лазерное излучение в красном спектре. Чтобы обеспечить STED-анализ биологических систем, красители и лазерные источники должны быть адаптированы к системе. Это стремление к лучшему анализу этих систем привело к появлению STED живых клеток и многоцветных STED, но также потребовалось все больше и больше современных красителей и систем возбуждения, чтобы приспособиться к возросшей функциональности.[7]

Одним из таких достижений стала разработка иммуномеченых клеток. Эти клетки представляют собой флуоресцентные красители STED, связанные с антителами через амидные связи. Первое использование этого метода связывало MR-121SE, красный краситель, с вторичным антимышиным антителом.[8] С момента первого применения этот метод применялся к гораздо более широкому спектру красителей, в том числе к зеленым, Atto 532,[15][16][17] и желтый цвет, Atto 590,[18] а также дополнительные красители, излучающие красный цвет. Кроме того, Atto 647N впервые был использован с этим методом для создания двухцветного STED.[19]

Приложения

За последние несколько лет STED превратился из сложной и очень специфической техники в общий флуоресцентный метод. В результате был разработан ряд методов, позволяющих расширить возможности STED и предоставить больше информации.

Структурный анализ

С самого начала процесса STED позволяла флуоресцентной микроскопии выполнять задачи, которые были возможны только с помощью электронной микроскопии. В качестве примера, STED был использован для разъяснения анализа структуры белка на уровне суборганелл. Обычным доказательством этого уровня исследований является наблюдение за филаментами цитоскелета. Кроме того, нейрофиламенты, актин, и тубулин часто используются для сравнения разрешающей способности STED и конфокального микроскопа.[20][21][22]

Используя STED, при исследовании было достигнуто латеральное разрешение 70-90 нм. SNAP25, человеческий белок, регулирующий слияние мембран. Это наблюдение показало, что SNAP25 формирует кластеры независимо от функциональности мотива SNARE и связывается с кластеризованным синтаксином.[23][24] Исследования сложных органелл, таких как митохондрии, также могут быть полезны при использовании STED-микроскопии для структурного анализа. Используя изготовленные на заказ микроскопы STED с латеральным разрешением менее 50 нм, митохондриальные белки Том20, VDAC1, и COX2 было обнаружено, что они распределяются как наноразмерные кластеры.[25][26] В другом исследовании использовалась самодельная STED-микроскопия и ДНК связывающий флуоресцентный краситель, длина фрагментов ДНК измеряется гораздо точнее, чем обычное измерение с конфокальная микроскопия.[27]

Корреляционные методы

Благодаря своей функции, STED-микроскопия часто может использоваться с другими методами высокого разрешения. Разрешение обоих электрон и атомно-силовая микроскопия даже лучше, чем разрешение STED, но за счет объединения атомной силы с STED, Shima et al. смогли визуализировать актиновый цитоскелет человека рак яичников клетки, наблюдая за изменениями жесткости клеток.[28]

Многоцветный

Многоцветный STED был разработан в ответ на растущую проблему использования STED для изучения зависимости между структурой и функцией белков. Для изучения этого типа сложной системы необходимо использовать как минимум два отдельных флуорофора. Используя два флуоресцентных красителя и пары пучков, возможно совместное изображение кластеров синаптических и митохондриальных белков с разрешением до 5 нм [18]. Многоцветный STED также использовался, чтобы показать, что разные популяции белков синаптических везикул не смешивают синаптические бутоны ускользания.[29][30] Используя двухцветный STED с многолетним визуализацией, можно получить трехканальный STED.

Живая клетка

Вначале STED считался полезным методом работы с живыми клетками.[13] К сожалению, единственный способ изучить клетки - пометить плазматическую мембрану органическими красителями.[29] Сочетание STED с флуоресцентной корреляционной спектроскопией показало, что холестерин -опосредованная ловушка молекулярных комплексов сфинголипиды, но только временно.[31] Однако только флуоресцентные белки обеспечивают возможность визуализации любой органеллы или белка в живой клетке. Было показано, что этот метод работает при латеральном разрешении 50 нм в клетках млекопитающих, экспрессирующих цитрин-тубулин.[32][33] Помимо обнаружения структур в клетках млекопитающих, STED позволил визуализировать кластеризацию меченных YFP белков PIN в плазматической мембране растительных клеток.[34]

Недавно было выполнено STED для многоцветных живых клеток с использованием импульсного лазера дальнего красного света и экспрессии CLIPf-tag и SNAPf-tag.[35]

STED со скоростью видео и выше

Для сверхвысокого разрешения требуются маленькие пиксели, а это означает, что в данном образце требуется больше места для захвата, что приводит к увеличению времени сбора. Однако размер фокусного пятна зависит от интенсивности лазера, используемого для истощения. В результате размер пятна можно регулировать, изменяя размер и скорость изображения. Затем можно достичь компромисса между этими двумя факторами для каждой конкретной задачи визуализации. Была записана частота 80 кадров в секунду с фокусными пятнами около 60 нм.[1][36] Для небольших полей зрения достигается скорость до 200 кадров в секунду.[37]

Проблемы

Фотообесцвечивание может происходить либо от возбуждения в еще более высокое возбужденное состояние, либо от возбуждения в триплетном состоянии. Чтобы предотвратить возбуждение возбужденного электрона в другое, более высокое возбужденное состояние, энергия фотона, необходимая для запуска альтернативного излучения, не должна перекрывать энергию возбуждения из одного возбужденного состояния в другое.[38] Это гарантирует, что каждый лазерный фотон, который контактирует с флуорофором, вызовет вынужденное излучение, а не приведет к переходу электрона в другое, более высокое энергетическое состояние. Состояния триплета живут намного дольше, чем синглетные состояния, и для предотвращения возбуждения триплетных состояний время между лазерными импульсами должно быть достаточно большим, чтобы позволить электрону релаксировать с помощью другого метода гашения, или необходимо добавить химическое соединение для гашения триплета. государственный.[20][39][40]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б Westphal, V .; С. О. Риццоли; М. А. Лаутербах; Д. Камин; Р. Ян; С. В. Ад (2008). "Оптическая наноскопия с видеоизображением в дальнем поле рассекает движение синаптических пузырьков". Наука. 320 (5873): 246–249. Bibcode:2008Sci ... 320..246W. Дои:10.1126 / science.1154228. PMID  18292304. S2CID  14169050.
  2. ^ а б Ад, S.W .; Вичманн, Дж. (1994). «Нарушение предела дифракционного разрешения с помощью стимулированного излучения: флуоресцентная микроскопия с истощением стимулированного излучения». Письма об оптике. 19 (11): 780–782. Bibcode:1994OptL ... 19..780H. Дои:10.1364 / OL.19.000780. PMID  19844443.
  3. ^ Klar, Thomas A .; Стефан В. Ад (1999). «Субдифракционное разрешение в флуоресцентной микроскопии дальнего поля». Письма об оптике. 24 (14): 954–956. Bibcode:1999OptL ... 24..954K. Дои:10.1364 / OL.24.000954. PMID  18073907.
  4. ^ https://scholar.google.ca/citations?user=F-MCeeAAAAAJ&hl
  5. ^ Охонин В.А., Методика исследования микроструктуры образцов. Патент SU 1374922., (См. Также в базе патентов СССР SU 1374922 ) дата приоритета 10 апреля 1986 г., Опубликовано 30 июля 1991 г., Рефераты по советским патентам, раздел EI, неделя 9218, Derwent Publications Ltd., Лондон, Великобритания; Класс S03, стр. 4. Цитируется патентами США 5394268 A (1993) и США RE38307 E1 (1995). От английский перевод: «Суть изобретения заключается в следующем. Люминесценция возбуждается в образце, помещенном в поле нескольких стоячих световых волн, вызывающих тушение люминесценции из-за вынужденных переходов ...».
  6. ^ Blom, H .; Брисмар, Х. (2014). «STED-микроскопия: повышенное разрешение для медицинских исследований?». Журнал внутренней медицины. 276 (6): 560–578. Дои:10.1111 / joim.12278. PMID  24980774.
  7. ^ а б Мюллер, Т .; Schumann, C .; Kraegeloh, A. (2012). "STED-микроскопия и ее приложения: новый взгляд на клеточные процессы в наномасштабе". ХимФисХим. 13 (8): 1986–2000. Дои:10.1002 / cphc.201100986. PMID  22374829.
  8. ^ а б Дыба, М .; Ад, С. В. (2003). "Фотостабильность флуоресцентного маркера при импульсном истощении возбужденного состояния посредством стимулированного излучения". Прикладная оптика. 42 (25): 5123–5129. Bibcode:2003АпОпт..42.5123D. Дои:10.1364 / AO.42.005123. PMID  12962391.
  9. ^ Török, P .; Манро, П. Р. Т. (2004). «Использование векторных пучков Гаусса-Лагерра в STED микроскопии». Оптика Экспресс. 12 (15): 3605–3617. Bibcode:2004OExpr..12.3605T. Дои:10.1364 / OPEX.12.003605. PMID  19483892.
  10. ^ Keller, J .; Schönle, A .; Ад, С. В. (2007). «Эффективные паттерны ингибирования флуоресценции для микроскопии RESOLFT». Оптика Экспресс. 15 (6): 3361–3371. Bibcode:2007OExpr..15.3361K. Дои:10.1364 / OE.15.003361. PMID  19532577. S2CID  31855914.
  11. ^ С. В. Ад, Ройсс, М. (январь 2010 г.). «Устройство двойного лучепреломления превращает стандартный сканирующий микроскоп в микроскоп STED, который также отображает ориентацию молекул». Оптика Экспресс. 18 (2): 1049–58. Bibcode:2010OExpr..18.1049R. Дои:10.1364 / OE.18.001049. PMID  20173926.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  12. ^ Wildanger, D .; Б. Р. Паттон; Х. Шилль; Л. Марселья; Дж. П. Хадден; С. Кнауэр; А. Шенле; Дж. Дж. Рэрити; Дж. Л. О’Брайен; С. У. Ад; Дж. М. Смит (2012). «Иммерсионное твердое тело облегчает флуоресцентную микроскопию с нанометровым разрешением и локализацией излучателя суб-Ангстрема». Современные материалы. 24 (44): OP309 – OP313. Дои:10.1002 / adma.201203033. ЧВК  3546393. PMID  22968917.
  13. ^ а б Klar, T. A .; С. Якобс; М. Дыба; А. Эгнер; С. В. Ад (2000). «Флуоресцентная микроскопия с дифракционным разрешающим барьером, нарушенным вынужденным излучением». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 97 (15): 8206–8210. Bibcode:2000PNAS ... 97,8206 К. Дои:10.1073 / пнас.97.15.8206. ЧВК  26924. PMID  10899992.
  14. ^ Blom, H .; Брисмар, Х. (2014). «STED-микроскопия: повышенное разрешение для медицинских исследований?». Журнал внутренней медицины. 276 (6): 560–578. Дои:10.1111 / joim.12278. PMID  24980774.
  15. ^ Ланг, Зибер (апрель 2006 г.). «Мотив SNARE необходим для образования кластеров синтаксина в плазматической мембране». Биофизический журнал. 90 (8): 2843–2851. Bibcode:2006BpJ .... 90.2843S. Дои:10.1529 / biophysj.105.079574. ЧВК  1414554. PMID  16443657.
  16. ^ Зибер, Дж. Дж .; К. Л. Уиллиг; Р. Хайнцманн; С. У. Ад; Т. Ланг (2006). «Мотив SNARE необходим для образования кластеров синтаксина в плазматической мембране». Биофиз. J. 90 (8): 2843–2851. Bibcode:2006BpJ .... 90.2843S. Дои:10.1529 / biophysj.105.079574. ЧВК  1414554. PMID  16443657.
  17. ^ Willig, K. I .; Дж. Келлер; М. Босси; С. В. Ад (2006). «STED-микроскопия позволяет разрешить сборки наночастиц». Новый J. Phys. 8 (6): 106. Bibcode:2006NJPh .... 8..106Вт. Дои:10.1088/1367-2630/8/6/106.
  18. ^ Wildanger, D .; Риттвегер; Kastrup, L .; Ад, С. В. (2008). «СТЭД-микроскопия с использованием лазерного источника суперконтинуума». Опт. выражать. 16 (13): 9614–9621. Bibcode:2008OExpr..16.9614W. Дои:10.1364 / oe.16.009614. PMID  18575529. S2CID  38016354.
  19. ^ Doonet, G .; Дж. Келлер; К. А. Вурм; С. О. Риццоли; В. Вестфаль; А. Шонле; Р. Ян; С. Якобс; C. Эггелинг; С. В. Ад (2007). «Двухцветная флуоресцентная наноскопия в дальней зоне». Биофиз. J. 92 (8): L67 – L69. Bibcode:2007BpJ .... 92L..67D. Дои:10.1529 / biophysj.107.104497. ЧВК  1831704. PMID  17307826.
  20. ^ а б Kasper, R .; Б. Харке; К. Фортманн; П. Тиннефельд; С. У. Ад; М. Зауэр (2010). "Одномолекулярная STED-микроскопия с использованием фотостабильных органических флуорофоров". Маленький. 6 (13): 1379–1384. Дои:10.1002 / smll.201000203. PMID  20521266.
  21. ^ Willig, K. I .; Б. Харке; Р. Медда; С. В. Ад (2007). «СТЭД-микроскопия с непрерывными волновыми пучками». Nat. Методы. 4 (11): 915–918. Дои:10.1038 / nmeth1108. HDL:11858 / 00-001M-0000-0012-DEE7-E. PMID  17952088. S2CID  5576096.
  22. ^ Buckers, J .; Д. Вильденджер; Г. Вичидомини; Л. Каструп; С. В. Ад (2011). «Одновременная многоцветная STED-визуализация в течение нескольких лет для анализа колокализации». Опт. выражать. 19 (4): 3130–3143. Bibcode:2011OExpr..19.3130B. Дои:10.1364 / OE.19.003130. PMID  21369135. S2CID  38820566.
  23. ^ Halemani, N.D .; И. Бетани; С. О. Риццоли; Т. Ланг (2010). «Структура и динамика двухспирального комплекса SNARE в живых клетках». Трафик. 11 (3): 394–404. Дои:10.1111 / j.1600-0854.2009.01020.x. PMID  20002656.
  24. ^ Geumann, U .; К. Шефер; Д. Ридель; Р. Ян; С. О. Риццоли (2010). «Белки синаптических мембран образуют стабильные микродомены в ранних эндосомах». Microsc. Res. Технология. 73 (6): 606–617. Дои:10.1002 / jemt.20800. PMID  19937745.
  25. ^ Singh, H .; Р. Лу; П. Ф. Г. Родригес; Y. Wu; Дж. К. Бопаса; Э. Стефани; Л. ТороМитохондрия (2012). «Визуализация и количественная оценка кластеров сердечных митохондриальных белков с помощью микроскопии STED». 2011. 12 (2): 230–236. Дои:10.1016 / j.mito.2011.09.004. ЧВК  3258335. PMID  21982778.
  26. ^ Wurm, C.A .; Д. Нейман; Р. Шмидт; А. Эгнер; С. Якобс (2010). Подготовка образцов для STED-микроскопии. Meth. Мол. Биол. Методы молекулярной биологии. 591. С. 185–199. Дои:10.1007/978-1-60761-404-3_11. HDL:11858 / 00-001M-0000-0012-D68F-7. ISBN  978-1-60761-403-6. PMID  19957131.
  27. ^ Ким, Намду; Ким, Хён Джун; Ким, Ёнгю; Мин, Кён Сок; Ким, Сон Гын (2016). «Прямое и точное измерение длины отдельных растянутых фрагментов ДНК с помощью динамического молекулярного расчесывания и наноскопии STED». Аналитическая и биоаналитическая химия. 408 (23): 6453–6459. Дои:10.1007 / s00216-016-9764-9. PMID  27457103. S2CID  5591747.
  28. ^ Sharma, S .; К. Сантискулвонг; Л. Бентолила; Дж. Рао; О. Дориго; Я. К. Гимзевский (2011). «Корреляционное наномеханическое профилирование с визуализацией F-актина сверхвысокого разрешения открывает новые возможности для понимания механизмов устойчивости к цисплатину в раковых клетках яичников». Наномедицина: нанотехнологии, биология и медицина. 8 (5): 757–766. Дои:10.1016 / j.nano.2011.09.015. PMID  22024198.
  29. ^ а б Hoopman, P .; А. Пунге; С. В. Барыш; В. Вестфаль; Дж. Бучкерс; Ф. Опазо; И. Бетани; М. А. Лаутербах; С. У. Ад; С. О. Риццоли (2010). «Эндосомная сортировка легко высвобождаемых синаптических везикул» (PDF). Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 107 (44): 19055–19060. Bibcode:2010PNAS..10719055H. Дои:10.1073 / pnas.1007037107. ЧВК  2973917. PMID  20956291.
  30. ^ Opazo, F .; А. Пунге; Дж. Бакерс; П. Хупманн; Л. Каструп; С. У. Ад; С. О. Риццоли (2010). «Ограниченное перемешивание компонентов синаптических везикул при рециклинге везикул». Трафик. 11 (6): 800–812. Дои:10.1111 / j.1600-0854.2010.01058.x. PMID  20230528.
  31. ^ Eggeling, C .; Ringemann, C .; Medda, R .; Schwarzmann, G .; Sandhoff, K .; Полякова, С .; Белов, В. Н .; Hein, B .; фон Миддендорф, С .; Schonle, A .; Ад, С. В. (2009). «Прямое наблюдение за наноразмерной динамикой мембранных липидов в живой клетке». Природа. 457 (7233): 1159–1162. Bibcode:2009 Натур.457.1159E. Дои:10.1038 / природа07596. HDL:11858 / 00-001M-0000-0012-D8CA-4. PMID  19098897. S2CID  4428863.
  32. ^ Willig, K. I .; Р. Р. Келлнер; Р. Медда; Б. Хельн; С. Якобс; С. В. Ад (2006). «Наноразмерное разрешение в микроскопии на основе GFP». Nat. Методы. 3 (9): 721–723. Дои:10.1038 / nmeth922. HDL:11858 / 00-001M-0000-0012-5CC4-1. PMID  16896340. S2CID  9887386.
  33. ^ Hein, B .; К. И. Виллиг; С. В. Ад (2008). «Наноскопия стимулированного истощения эмиссии (STED) флюоресцентной меченной белком органеллы внутри живой клетки». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 105 (38): 14271–14276. Bibcode:2008PNAS..10514271H. Дои:10.1073 / pnas.0807705105. ЧВК  2538451. PMID  18796604.
  34. ^ Kleine-Vehn, J .; Вабник, К .; Мартиньер, А .; Langowski, L .; Willig, K .; Naramoto, S .; Leitner, J .; Tanaka, H .; Jakobs, S .; Роберт, S .; Luschnig, C .; Govaerts, W .; Ад, S.W .; Runions, J .; Фримл, Дж. (2011). «Рециклинг, кластеризация и эндоцитоз совместно поддерживают полярность носителя ауксина PIN на плазматической мембране». Мол. Syst. Биол. 7: 540. Дои:10.1038 / msb.2011.72. ЧВК  3261718. PMID  22027551.
  35. ^ Pellett, P.A .; X. Солнце; Т. Дж. Гулд; Дж. Э. Ротман; M. Q. Xu; И. Р. Корреа; Дж. Беверсдорф (2011). «Двухцветная STED-микроскопия в живых клетках». Биомед. Опт. выражать. 2 (8): 2364–2371. Дои:10.1364 / boe.2.002364. ЧВК  3149534. PMID  21833373.
  36. ^ Westphal, V .; М. А. Лаутербах; А. Ди Никола; С. В. Ад (2007). «Динамическая флюоресцентная наноскопия в дальней зоне». Новый J. Phys. 9 (12): 435. Bibcode:2007NJPh .... 9..435Вт. Дои:10.1088/1367-2630/9/12/435.
  37. ^ Lauterbach, M.A .; Чайтанья К. Уллал; Фолькер Вестфаль; Стефан В. Ад (2010). «Динамическое отображение наноструктур коллоидных кристаллов со скоростью 200 кадров в секунду». Langmuir. 26 (18): 14400–14404. Дои:10.1021 / la102474p. PMID  20715873.
  38. ^ Hotta, J. I .; Э. Фрон; П. Дедеккер; К. П. Ф. Янссен; К. Ли; К. Маллен; Б. Харке; Дж. Бакерс; С. У. Ад; Дж. Хофкенс (2010). «Спектроскопическое обоснование эффективных флуорофоров для микроскопии с вынужденной эмиссией». Варенье. Chem. Soc. 132 (14): 5021–5023. Дои:10.1021 / ja100079w. HDL:11858 / 00-001M-0000-0010-9310-1. PMID  20307062.
  39. ^ Vogelsang, J .; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хейлеманн; М. Зауэр; П. Тиннедельд (2008). «Ein System aus Reduktions- und Oxidationsmittel verringert Photobleichen und Blinken von Fluoreszenzfarbstoffen». Энгью. Chem. 120 (29): 5545–5550. Дои:10.1002 / ange.200801518.
  40. ^ Vogelsang, J .; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хейлеманн; М. Зауэр; П. Тиннедельд (2008). «Система восстановления и окисления минимизирует фотообесцвечивание и мигание флуоресцентных красителей». Энгью. Chem. Int. Эд. 47 (29): 5465–5469. Дои:10.1002 / anie.200801518. PMID  18601270.

внешняя ссылка