Флуоресцентная гибридизация in situ - Fluorescence in situ hybridization

Визуализация мультиплексной РНК в клетках с использованием анализов ViewRNA FISH
Метафазная клетка, положительная для bcr / abl перестановка (связанная с хронический миелолейкоз ) с помощью FISH. Хромосомы можно увидеть синим цветом. Хромосома, отмеченная зеленым и красные точки (вверху слева) - это то место, где присутствует перестановка.

Флуоресценция на месте гибридизация (РЫБЫ) это молекулярно-цитогенетический техника, которая использует флуоресцентные зонды которые привязаны только к тем частям нуклеиновая кислота последовательность с высокой степенью последовательности взаимодополняемость. Он был разработан биомедицинскими исследователями в начале 1980-х годов.[1] для обнаружения и локализации наличия или отсутствия специфических ДНК последовательности на хромосомы. Флуоресцентная микроскопия может использоваться, чтобы узнать, где флуоресцентный зонд связан с хромосомами. FISH часто используется для нахождения определенных особенностей ДНК для использования в генетическое консультирование, медицина и идентификация видов.[2] FISH также можно использовать для обнаружения и локализации конкретных мишеней РНК (мРНК, днРНК и miRNA )[нужна цитата ] в клетках, циркулирующих опухолевых клетках и образцах тканей. В этом контексте это может помочь определить пространственно-временные паттерны экспрессия гена внутри клеток и тканей.

Зонды - РНК и ДНК

ViewRNA обнаружение miR-133 (зеленый) и мРНК миогенина (красный) в дифференцирующихся клетках C2C12

В биологии зонд представляет собой одиночную цепь ДНК или РНК, которая комплементарна интересующей нуклеотидной последовательности.

Зонды РНК могут быть разработаны для любого гена или любой последовательности в гене для визуализации мРНК,[3][4][5] днРНК[6][7][8] и miRNA в тканях и клетках. FISH используется для изучения цикла клеточного воспроизводства, в частности, межфазной границы ядер на предмет любых хромосомных аномалий.[9] FISH позволяет анализировать большую серию архивных случаев, намного проще идентифицировать точно определенную хромосому, создавая зонд с искусственным хромосомным основанием, который будет привлекать похожие хромосомы.[9] Сигналы гибридизации для каждого зонда при обнаружении нуклеиновой аномалии.[9] Каждый зонд для обнаружения мРНК и днРНК состоит из ~ 20-50 пар олигонуклеотидов, каждая пара покрывает пространство 40-50 п.н. Специфика зависит от конкретной используемой техники FISH. Для обнаружения miRNA зонды используют запатентованную химию для специфического обнаружения miRNA и покрывают всю последовательность miRNA.

Уротелиальные клетки, отмеченные четырьмя разными зондами

Зонды часто получают из фрагментов ДНК, которые были выделены, очищены и амплифицированы для использования в Проект "Геном человека". Размер генома человека настолько велик по сравнению с длиной, которую можно было секвенировать напрямую, что пришлось разделить геном на фрагменты. (В конечном итоге эти фрагменты были упорядочены путем переваривания копии каждого фрагмента на еще более мелкие фрагменты с использованием специфичных для последовательности эндонуклеаз, измерения размера каждого небольшого фрагмента с использованием эксклюзионная хроматография и используя эту информацию, чтобы определить, где большие фрагменты перекрывают друг друга.) Чтобы сохранить фрагменты с их индивидуальными последовательностями ДНК, фрагменты были добавлены в систему постоянно реплицирующихся популяций бактерий. Клональные популяции бактерий, каждая из которых поддерживает одну искусственную хромосому, хранятся в различных лабораториях по всему миру. Искусственные хромосомы (BAC ) можно выращивать, извлекать и маркировать в любой лаборатории, содержащей библиотеку. Геномные библиотеки часто называют в честь учреждения, в котором они были разработаны. Примером может служить библиотека RPCI-11, названная в честь Института рака Розуэлл-Парк в Буффало, штат Нью-Йорк. Эти фрагменты имеют порядка 100 тысяч пар оснований и являются основой для большинства FISH-зондов.

Процесс подготовки и гибридизации - РНК

Клетки, циркулирующие опухолевые клетки (CTCs), или фиксированные формалином залитые парафином (FFPE) или замороженные срезы ткани фиксируются, а затем проницаемы для обеспечения доступности мишени. FISH также успешно проводился на незакрепленных ячейках.[10] Зонд, специфичный для мишени, состоящий из 20 пар олигонуклеотидов, гибридизуется с целевой РНК (ями). Отдельные, но совместимые системы усиления сигнала позволяют проводить мультиплексный анализ (до двух мишеней на анализ). Усиление сигнала достигается посредством серии последовательных шагов гибридизации. В конце анализа образцы ткани визуализируются под флуоресцентным микроскопом.

Процесс подготовки и гибридизации - ДНК

Схема принципа эксперимента FISH по локализации гена в ядре.

Сначала строится зонд. Зонд должен быть достаточно большим для специфической гибридизации со своей мишенью, но не настолько большим, чтобы препятствовать процессу гибридизации. Зонд отмечен непосредственно с флуорофоры, с целями для антитела или с биотин. Пометку можно сделать разными способами, например ник перевод, или же Полимеразной цепной реакции с использованием тегов нуклеотиды.

Затем межфазный или же метафаза производится хромосомный препарат. Хромосомы прочно прикреплены к субстрат, обычно стекло. Повторяющиеся последовательности ДНК необходимо блокировать путем добавления к образцу коротких фрагментов ДНК. Затем зонд наносят на хромосомную ДНК и инкубируют приблизительно 12 часов при гибридизации. Несколько стадий промывки удаляют все негибридизированные или частично гибридизированные зонды. Затем результаты визуализируются и количественно оцениваются с помощью микроскопа, который способен возбуждать краситель и записывать изображения.

Если флуоресцентный сигнал слабый, может потребоваться усиление сигнала, чтобы превысить порог обнаружения микроскоп. Сила флуоресцентного сигнала зависит от многих факторов, таких как эффективность маркировки зонда, тип зонда и тип красителя. Флуоресцентно помеченный антитела или же стрептавидин связаны с молекулой красителя. Эти вторичные компоненты выбраны так, чтобы у них был сильный сигнал.


Варианты зондов и анализа

FISH - это очень общая техника. Различия между различными методами FISH обычно обусловлены вариациями в последовательности и маркировке зондов; и как они используются в сочетании. Зонды делятся на две общие категории: клеточные и бесклеточные. Под флуоресцентной гибридизацией "in situ" подразумевается размещение зонда в клетке.

Размер зонда важен, потому что более длинные зонды гибридизуются менее специфично, чем более короткие зонды, поэтому короткие цепи ДНК или РНК (часто 10-25 нуклеотидов), которые комплементарны данной целевой последовательности, часто используются для определения местоположения мишени. Перекрытие определяет разрешение обнаруживаемых функций. Например, если цель эксперимента - определить точку останова перемещение, то перекрытие зондов - степень, в которой одна последовательность ДНК содержится в соседних зондах - определяет минимальное окно, в котором может быть обнаружена точка останова.

Сочетание последовательностей зондов определяет тип функции, которую зонд может обнаружить. Зонды, которые гибридизуются по всей хромосоме, используются для подсчета количества определенной хромосомы, выявления транслокаций или выявления внехромосомных фрагментов хроматин. Это часто называют «окраской целых хромосом». Если использовать все возможные зонды, каждая хромосома (весь геном) будет помечена флуоресцентно, что не будет особенно полезно для определения особенностей отдельных последовательностей. Однако можно создать смесь зондов меньшего размера, которые специфичны для определенной области (локуса) ДНК; эти смеси используются для обнаружения делеционные мутации. В сочетании с определенным цветом смесь зондов, специфичных для локуса, используется для обнаружения очень специфических транслокаций. Для подсчета хромосом часто используются специальные смеси зондов, специфичных для локусов, путем связывания с центромерный области хромосом, которые достаточно различимы, чтобы идентифицировать каждую хромосому (за исключением Хромосома 13, 14, 21, 22.)

В ряде других методов используются смеси зондов разного цвета. Может быть обнаружен диапазон цветов в смесях флуоресцентных красителей, поэтому каждая хромосома человека может быть идентифицирована по характерному цвету с использованием смесей полных хромосомных зондов и различных соотношений цветов. Хотя хромосом больше, чем легко различимых цветов флуоресцентных красителей, можно использовать соотношения смесей зондов для создания вторичный цвета. Похожий на сравнительная геномная гибридизация, смесь зондов для вторичных цветов создается путем смешивания правильного соотношения двух наборов зондов разного цвета для одной и той же хромосомы. Этот метод иногда называют M-FISH.

Та же физика, которая делает возможным разнообразие цветов для M-FISH, может быть использована для обнаружения транслокаций. То есть кажется, что смежные цвета перекрываются; наблюдается вторичный цвет. Некоторые анализы разработаны таким образом, что вторичный цвет будет присутствовать или отсутствовать в интересующих случаях. Примером может служить обнаружение BCR / ABL транслокации, где вторичный цвет указывает на болезнь. Этот вариант часто называют FISH двойного слияния или D-FISH. Противоположная ситуация, когда отсутствие вторичного цвета является патологическим, проиллюстрирована анализом, используемым для исследования транслокаций, где известна или постоянна только одна из контрольных точек. Локус-специфические зонды сделаны для одной стороны точки останова и другой интактной хромосомы. В нормальных клетках наблюдается вторичный цвет, но при транслокации наблюдаются только основные цвета. Эту технику иногда называют «РЫБОЙ на части».

Одномолекулярная РНК FISH

Одномолекулярная РНК FISH, также известная как Stellaris® RNA FISH,[11] представляет собой метод обнаружения и количественного определения мРНК и других длинных молекул РНК в тонком слое образца ткани. Цели могут быть надежно отображены за счет применения нескольких коротких одиночных меток. олигонуклеотидные зонды.[12] Обвязка до 48 флуоресцентная маркировка олигонуклеотидов к одной молекуле мРНК обеспечивает достаточную флуоресценцию для точного обнаружения и локализации каждой целевой мРНК в широком поле флуоресцентная микроскопия изображение. Зонды, не связывающиеся с намеченной последовательностью, не достигают достаточной локальной флуоресценции, чтобы отличить их от фон.[13]

Анализ одиночной молекулы РНК FISH можно проводить в симплексном или мультиплекс, и может использоваться в качестве дополнительного эксперимента для количественная ПЦР, или изображение одновременно с флуоресцентное антитело проба. Эта технология имеет потенциальное применение в диагноз рака,[14] нейробиология, экспрессия гена анализ,[15] и сопутствующая диагностика.

Волокно РЫБА

В альтернативной технике межфазный или препараты метафазы, волокна FISH, интерфазные хромосомы прикрепляются к предметному стеклу таким образом, что они вытягиваются по прямой линии, а не туго свертываются, как в обычном FISH, или хромосомная территория конформация, как в интерфазе FISH. Это достигается применением механического срезать по длине слайда, либо к ячейкам, которые были прикреплены к слайду, а затем лизированный, или к раствору очищенной ДНК. Техника, известная как расчесывание хромосом все чаще используется для этой цели. Расширенная конформация хромосом обеспечивает значительно более высокое разрешение - даже до нескольких килобазы. Подготовка образцов волокна FISH, хотя концептуально проста, является довольно квалифицированным делом, и только специализированные лаборатории используют эту технику на регулярной основе.[нужна цитата ]

Q-FISH

Основная статья: Q-FISH

Q-FISH сочетает в себе FISH с PNA и компьютерное программное обеспечение для количественной оценки интенсивности флуоресценции. Этот метод обычно используется в теломер длина исследования.

Flow-FISH

Основная статья: Flow-FISH

Flow-FISH использует проточной цитометрии для автоматического выполнения FISH с использованием измерений флуоресценции каждой клетки.

МА-РЫБА

FISH с использованием микрофлюидов (МА-РЫБА ) использует микрожидкостный поток для повышения эффективности гибридизации ДНК, снижения потребления дорогостоящих зондов FISH и сокращения времени гибридизации. MA-FISH применяется для обнаружения HER2 ген в тканях рака груди.[16]

МАР-РЫБА

Микроавторадиография FISH - это метод комбинирования радиоактивно меченых субстратов с обычным FISH для одновременного обнаружения филогенетических групп и метаболической активности.

Гибрид Fusion-FISH

Гибридный Fusion FISH (ВЧ-РЫБА ) использует комбинацию первичного аддитивного возбуждения / испускания флуорофоров для генерации дополнительных спектров посредством процесса маркировки, известного как динамическая оптическая передача (DOT). Три первичных флуорофора способны генерировать в общей сложности 7 легко обнаруживаемых эмиссионных спектров в результате комбинаторной маркировки с использованием DOT. Hybrid Fusion FISH позволяет использовать много мультиплексные приложения FISH, предназначенные для панелей клинической онкологии. Технология предлагает более быструю оценку с помощью эффективных наборов зондов, которые можно легко обнаружить с помощью традиционных флуоресцентных микроскопов.

Медицинские приложения

Часто родители детей с нарушение развития хотят узнать больше о состоянии своего ребенка, прежде чем решат завести другого ребенка. Эти опасения могут быть решены путем анализа ДНК родителей и ребенка. В случаях, когда нарушение развития ребенка не выяснено, его причину потенциально можно определить с помощью FISH и цитогенетический техники. Примеры заболеваний, которые диагностируются с помощью FISH, включают: Синдром Прадера-Вилли, Синдром ангельмана, Синдром делеции 22q13, хронический миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, Кри-дю-чат, Велокардиофациальный синдром, и Синдром Дауна. РЫБА на сперматозоиды показан мужчинам с аномальными соматическими или мейотическими кариотип а также те, у кого олигозооспермия, поскольку примерно у 50% мужчин с олигозооспермией наблюдается повышенная частота хромосомных аномалий сперматозоидов.[17] Анализ хромосом 21, X и Y достаточен, чтобы идентифицировать олигозооспермию из группы риска.[17]

В медицине FISH можно использовать для формирования диагноз, оценить прогноз, или оценить ремиссия болезни, такой как рак. Затем лечение может быть индивидуализировано. Традиционное обследование, включающее анализ метафазных хромосом, часто не может определить особенности, которые отличают одно заболевание от другого, из-за тонких хромосомных особенностей; FISH может прояснить эти различия. FISH также может использоваться для более легкого обнаружения больных клеток, чем стандартные Цитогенетический методы, которые требуют деления клеток и требуют трудоемкой ручной подготовки и анализа слайдов технологом. FISH, с другой стороны, не требует живых клеток и может быть определен автоматически, компьютер подсчитывает присутствующие флуоресцентные точки. Однако для того, чтобы различать тонкие различия в образцах полос на изогнутых и скрученных метафазных хромосомах, требуется обученный технолог. FISH может быть включен в Лаборатория на чипе микрофлюидное устройство. Эта технология все еще находится в стадии разработки, но, как и другие методы лаборатории на кристалле, она может привести к созданию более портативных диагностических методов.[18][19]

На этом рисунке показан процесс флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), используемый для идентификации патогенов. Сначала у пациента берут образец инфицированной ткани. Затем синтезируется олигонуклеотид, который комплементарен генетическому коду предполагаемого патогена, и химически маркируется флуоресцентным зондом. Затем собранный образец ткани необходимо подвергнуть химической обработке, чтобы сделать клеточные мембраны проницаемыми для флуоресцентно меченного олигонуклеотида. После обработки образца ткани добавляется помеченный комплементарный олигонуклеотид. Флуоресцентно меченый олигонуклеотид будет связываться только с комплементарной ДНК предполагаемого патогена. Если патоген присутствует в образце ткани, то клетки патогена будут светиться / флуоресцировать после обработки меченым олигонуклеотидом. Все остальные клетки после обработки не светятся.
Общий процесс флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), используемый для идентификации бактериальных патогенов. Сначала у пациента берут образец инфицированной ткани. Затем синтезируется олигонуклеотид, комплементарный генетическому коду предполагаемого патогена, и химически маркируется флуоресцентным зондом. Образец ткани химически обрабатывают, чтобы сделать клеточные мембраны проницаемыми для флуоресцентно меченного олигонуклеотида. Затем добавляется флуоресцентная метка, которая связывается только с комплементарной ДНК предполагаемого патогена. Если патоген присутствует в образце ткани, то клетки патогена будут флуоресцировать после обработки меченым олигонуклеотидом. Никакие другие клетки не светятся.

Идентификация видов

FISH часто используется в клинические исследования. Если пациент инфицирован подозреваемым возбудитель Бактерии из тканей или жидкостей пациента, как правило, выращивают на агаре для определения патогена. Однако многие бактерии, даже хорошо известные виды, плохо растут в лабораторных условиях. FISH можно использовать для непосредственного обнаружения подозреваемого на небольших образцах тканей пациента.

FISH также можно использовать для сравнения геномов двух биологических разновидность, чтобы вывести эволюционный отношения. Подобный метод гибридизации называется зоопарк. Бактериальные FISH-зонды часто служат праймерами для 16s рРНК область, край.

FISH широко используется в области микробная экология, идентифицировать микроорганизмы. Биопленки, например, состоят из сложных (часто) многовидовых бактериальных организаций. Подготовка ДНК-зондов для одного вида и выполнение FISH с помощью этого зонда позволяет визуализировать распределение этого конкретного вида в биопленке. Подготовка зондов (двух разных цветов) для двух видов позволяет исследователям визуализировать / изучать совместную локализацию этих двух видов в биопленке и может быть полезна для определения тонкой архитектуры биопленки.

Сравнительная геномная гибридизация

Сравнительная геномная гибридизация можно описать как метод, который использует FISH параллельно со сравнением силы гибридизации, чтобы вспомнить любые серьезные нарушения в процессе дупликации последовательностей ДНК в геноме ядра.[20]

Виртуальный кариотип

Виртуальное кариотипирование это еще одна экономичная, клинически доступная альтернатива панелям FISH, использующая от тысяч до миллионов зондов на одном массиве для обнаружения изменений числа копий в масштабе всего генома с беспрецедентным разрешением. В настоящее время этот тип анализа позволяет обнаруживать только прирост и потерю хромосомного материала и не обнаруживает сбалансированные перестройки, такие как транслокации и инверсии, которые являются отличительными отклонениями, наблюдаемыми при многих типах лейкемии и лимфомы.

Спектральный кариотип

Спектральное кариотипирование - это изображение цветных хромосом. Спектральное кариотипирование включает в себя FISH с использованием нескольких форм многих типов зондов, в результате чего каждая хромосома маркируется через ее метафазную стадию. Этот тип кариотипирования используется специально при поиске расположения хромосом.

Смотрите также

Галерея

  • Еще одна схема процесса FISH.

  • Микрожидкостный чип, который снизил стоимость теста FISH на 90%.

  • Изображение двойной этикетки FISH; Бифидобактерии Cy3, Всего бактерий FITC.

  • Параспеклы визуализируются одномолекулярным FISH против NEAT1 (Quasar 570) в клетках U-2 OS (DAPI).

Рекомендации

  1. ^ Langer-Safer, P. R .; Левин, М .; Уорд, Д. К. (1982). «Иммунологический метод картирования генов на Дрозофила политенные хромосомы ". Труды Национальной академии наук. 79 (14): 4381–5. Bibcode:1982PNAS ... 79.4381L. Дои:10.1073 / pnas.79.14.4381. ЧВК  346675. PMID  6812046.
  2. ^ Аманн, Рудольф; Фукс, Бернхард М. (2008). "Идентификация отдельных клеток в микробных сообществах с помощью улучшенной флуоресцентной на месте методы гибридизации ". Обзоры природы Микробиология. 6 (5): 339–348. Дои:10.1038 / nrmicro1888. PMID  18414500. S2CID  22498325.
  3. ^ Энтони, С. Дж .; St. Leger, J. A .; Pugliares, K .; Ip, H. S .; Chan, J.M .; Карпентер, З. У .; Наваррете-Масиас, I .; Санчес-Леон, М .; Saliki, J. T .; Pedersen, J .; Karesh, W .; Daszak, P .; Rabadan, R .; Rowles, T .; Липкин, В. И. (2012). «Появление смертельного птичьего гриппа у тюленей гавани Новой Англии». мБио. 3 (4): e00166 – e00112. Дои:10.1128 / mBio.00166-12. ЧВК  3419516. PMID  22851656.
  4. ^ Everitt, A.R .; Clare, S .; Pertel, T .; John, S.P .; Уош, Р. С .; Smith, S.E .; Chin, C. R .; Feeley, E.M .; Sims, J. S .; Адамс, Д. Дж .; Wise, H.M .; Kane, L .; Goulding, D .; Digard, P .; Анттила, В .; Baillie, J. K .; Walsh, T. S .; Хьюм, Д. А .; Palotie, A .; Xue, Y .; Colonna, V .; Тайлер-Смит, К .; Даннинг, Дж .; Gordon, S. B .; Everingham, K .; Dawson, H .; Надежда, Д .; Ramsay, P .; Уолш (местный ведущий исследователь), Т. С .; и другие. (2012). «IFITM3 ограничивает заболеваемость и смертность от гриппа». Природа. 484 (7395): 519–23. Bibcode:2012Натура.484..519.. Дои:10.1038 / природа10921. ЧВК  3648786. PMID  22446628.
  5. ^ Louzada, S .; Adega, F .; Чавес, Р. (2012). «Определение линий опухолевых клеток молочной железы сестринских крыс HH-16 cl.2 / 1 и HH-16.cl.4 в качестве in vitro ячеечная модель для Эрбб2". PLOS ONE. 7 (1): e29923. Bibcode:2012PLoSO ... 729923L. Дои:10.1371 / journal.pone.0029923. ЧВК  3254647. PMID  22253826.
  6. ^ Тинг, Д. Т .; Lipson, D .; Paul, S .; Бранниган, Б. У .; Ахаванфард, С .; Коффман, Э. Дж .; Contino, G .; Deshpande, V .; Iafrate, A. J .; Летовский, С .; Ривера, М. Н .; Bardeesy, N .; Maheswaran, S .; Хабер, Д. А. (2011). «Аберрантная сверхэкспрессия сателлитных повторов при раке поджелудочной железы и других эпителиальных раках». Наука. 331 (6017): 593–6. Bibcode:2011Научный ... 331..593Т. Дои:10.1126 / science.1200801. ЧВК  3701432. PMID  21233348.
  7. ^ Zhang, B .; Arun, G .; Mao, Y. S .; Лазарь, З .; Hung, G .; Bhattacharjee, G .; Сяо, X .; Бут, С. Дж .; Wu, J .; Zhang, C .; Спектор, Д. Л. (2012). «LncRNA Malat1 незаменима для развития мышей, но ее транскрипция играет цис-регулирующую роль у взрослых». Отчеты по ячейкам. 2 (1): 111–23. Дои:10.1016 / j.celrep.2012.06.003. ЧВК  3408587. PMID  22840402.
  8. ^ Лук-порей.; Kunkeaw, N .; Jeon, S.H .; Lee, I .; Johnson, B.H .; Канг, Г. -Ю .; Bang, J. Y .; Park, H. S .; Leelayuwat, C .; Ли, Ю. С. (2011). «Предшественник miR-886, новая некодирующая РНК, репрессированная при раке, связывается с PKR и модулирует ее активность». РНК. 17 (6): 1076–89. Дои:10.1261 / rna.2701111. ЧВК  3096040. PMID  21518807.
  9. ^ а б c Bernasconi, B .; Karamitopolou-Diamantiis, E .; Торнилло, Л .; Lugli, A .; Di Vizio, D .; Dirnhofer, S .; Wengmann, S .; Glatz-Krieger, K .; Fend, F .; Capella, C .; Insabato, L .; Терраччано, Л. М. (2008). «Хромосомная нестабильность в лимфомах лимфоидной ткани, связанных со слизистой оболочкой желудка: флуоресцентное исследование гибридизации in situ с использованием подхода тканевых микроматриц». Патология человека. 39 (4): 536–42. Дои:10.1016 / j.humpath.2007.08.009. PMID  18234275.
  10. ^ Haroon, Mohamed F .; Скеннертон, Коннор Т .; Стин, Джейсон А .; Лахнер, Нэнси; Гугенгольц, Филип и Тайсон, Джин В. (2013). «Глава первая - флуоресцентная гибридизация in situ в растворе и активированная флуоресценцией сортировка клеток для восстановления единичных клеток и популяционного генома». В Ф. Делонг Эдвард (ред.). Методы в энзимологии. 531. Академическая пресса. С. 3–19.
  11. ^ Орджало, Артуров. Jr .; Йоханссон, HansE. (01.01.2016). Фэн, Йи; Чжан, Линь (ред.). Stellaris® РНК-флуоресцентная гибридизация in situ для одновременного обнаружения незрелых и зрелых длинных некодирующих РНК в прикрепленных клетках. Методы молекулярной биологии. 1402. Springer Нью-Йорк. С. 119–134. Дои:10.1007/978-1-4939-3378-5_10. ISBN  9781493933761. PMID  26721487.
  12. ^ Raj, A .; Van Den Bogaard, P .; Рифкин, С. А .; Van Oudenaarden, A .; Тяги, С. (2008). «Визуализация отдельных молекул мРНК с использованием нескольких зондов с одной меткой». Природные методы. 5 (10): 877–9. Дои:10.1038 / nmeth.1253. ЧВК  3126653. PMID  18806792.
  13. ^ Biosearch Technologies подписывает эксклюзивную лицензию на Single Molecule FISH Technologies от UMDNJ. biosearchtech.com
  14. ^ Cagir, B .; Гельманн, А .; Park, J .; Fava, T .; Танкелевич, А .; Bittner, E.W .; Weaver, E.J .; Palazzo, J. P .; Вайнберг, Д .; Фрай, Р. Д .; Вальдман, С. А. (1999). «Новый тест на рецидив рака толстой кишки». Анналы внутренней медицины. 131 (11): 805–12. Дои:10.7326/0003-4819-131-11-199912070-00024. PMID  10610624.
  15. ^ Kosman, D .; Mizutani, C.M .; Лимоны, D; Cox, W. G .; Макгиннис, Вт; Бир, Э (2004). «Мультиплексное обнаружение экспрессии РНК в эмбрионах дрозофилы». Наука. 305 (5685): 846. Дои:10.1126 / science.1099247. PMID  15297669. S2CID  26313219.
  16. ^ Nguyen HT, Trouillon R, Matsuoka S, Fiche M, de Leval L, Bisig B и др. (Янв 2017). «Микрожидкостная флуоресценция in situ гибридизация для преимущественной оценки рецептора 2 эпидермального фактора роста человека при раке груди». Лаборатория Инвест. 97 (1): 93–103. Дои:10.1038 / labinvest.2016.121. PMID  27892928.
  17. ^ а б Sarrate, Z .; Vidal, F .; Бланко, Дж. (2010). «Роль исследований флуоресцентной гибридизации сперматозоидов in situ у бесплодных пациентов: показания, подход к исследованию и клиническая значимость». Фертильность и бесплодие. 93 (6): 1892–902. Дои:10.1016 / j.fertnstert.2008.12.139. PMID  19254793.
  18. ^ Kurz, C.M .; v.d. Moosdijk, S .; Thielecke, H .; Фельтен, Т. (2011). "На пути к платформе клеточного многопараметрического анализа: флуоресцентный на месте гибридизация (FISH) на чипах с матрицами микролунок ». Ежегодная международная конференция общества инженеров IEEE в медицине и биологии, 2011 г.. Материалы конференции: ... Ежегодная международная конференция общества инженеров IEEE в медицине и биологии. IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. Ежегодная конференция. 2011. С. 8408–11. Дои:10.1109 / IEMBS.2011.6092074. ISBN  978-1-4577-1589-1. PMID  22256298. S2CID  4955677.
  19. ^ Dill, K .; Hui Liu, R .; Гродзинский, П. (2008). Микроматрицы: подготовка, микрофлюидика, методы обнаружения и биологические применения. Springer. п. 323. ISBN  978-0387727165.
  20. ^ «Сравнительная геномная гибридизация». Словарь научных и технических терминов Макгроу-Хилла. Получено 19 сентября, 2013.

дальнейшее чтение

внешняя ссылка