Романовский морилка - Romanowsky stain

Фильм крови с Пятно Гимзы. белые кровяные клетки (в центре) в окружении красные кровяные тельца.

Окраска по Романовскому, также известный как Окрашивание по Романовскому – Гимзе, является прототипом окрашивание техника, которая была предшественницей нескольких различных, но похожих красок, широко используемых в гематология (исследование крови) и цитопатология (исследование больных клеток). Красители типа Романовского используются для дифференциации клетки для микроскопического исследования в патологический образцы, особенно кровь и Костный мозг фильмы[1] и для обнаружения паразитов, таких как малярия в крови.[2][3][4][5] Пятна, которые связаны с пятнами типа Романовского или образованы от них, включают: Гимза, Дженнер, Райт, Поле, Май – Грюнвальд и Leishman пятна. Методика окрашивания названа в честь русского врача. Дмитрий Леонидович Романовский (1861–1921), который был одним из первых, кто осознал его потенциал для использования в качестве пятна крови.[6]

Механизм

Ценность окрашивания по Романовскому заключается в его способности воспроизводить широкий диапазон оттенков, что позволяет легко дифференцировать клеточные компоненты. Это явление называется Эффект Романовского, или в более общем смысле как метахромазия.[7]

Эффект Романовского

Фильм крови запятнанный Гимза показывая Плазмодий (центр изображения), паразит, вызывающий малярия инфекции.

В 1891 г. Романовский[8][9][10] появилось пятно с помощью смеси эозин (обычно эозин Y ) и старые решения метиленовый синий которые формировали оттенки, не связанные только с окрашивающими компонентами: характерные оттенки фиолетового в хроматин ядра клетки и внутри гранул в цитоплазма некоторых лейкоцитов. Это стало известно как эффект Романовского или Романовского-Гимзы.[11][12][6][13][4] Эозин и чистый метиленовый синий по отдельности (или в комбинации) не вызывают эффекта Романовского,[13][4] и активные пятна, которые производят эффект, теперь считаются лазурный B и эозин.[14][3][13]

Полихромированный метиленовый синий

Пятна по типу Романовского могут быть получены либо из комбинации чистых красителей, либо из метиленового синего, который подвергался воздействию окислительный деметилирование, что приводит к распаду метиленового синего на множество других пятен, некоторые из которых необходимы для создания эффекта Романовского.[15][4] Метиленовый синий, который подвергся окислительному процессу, известен как «полихромированный метиленовый синий».[15][4] Полихромированный метиленовый синий может содержать до 11 красителей, в том числе метиленовый синий, лазурный А, лазурный B, лазурный C, тионин, метиленовый фиолетовый Bernthesen, метилтионолин и тионолин.[4] Точный состав полихромированного метиленового синего зависит от используемого метода, и даже партии красителя от одного производителя могут отличаться по составу.[15]

Хотя было показано, что лазурь B и эозин являются необходимыми компонентами для создания эффекта Романовского,[14][3][13] эти красители в чистом виде не всегда использовались при приготовлении окрашивающих растворов.[4] Первоначальные источники лазурного B (одного из продуктов окисления метиленового синего) были из растворов полихромированного метиленового синего, которые обрабатывали окислителями или позволяли естественным образом стареть в случае Романовского.[3][13] Эрнст Малаховский в 1891 году был первым, кто целенаправленно применил полихромный метиленовый синий для окраски по типу Романовского.[15][16]

Типы

Май-Грюнвальд-Гимза

Основная статья: Пятно Мая – Грюнвальда

Окрашивание по Маю-Грюнвальду-Гимзе представляет собой двухэтапную процедуру, которая включает сначала окрашивание красителем Мая-Грюнвальда, которое не дает эффекта Романовского, а затем окрашивание красителем Гимза, которое действительно дает эффект Романовского.[17]

Пятна Райта и Райта-Гимзы

Основная статья: Пятно Райта

Пятно Райта можно использовать отдельно или в сочетании с пятном Гимзы, которое известно как пятно Райта-Гимзы.[1] Пятно Райта названо в честь Джеймс Гомер Райт кто в 1902 г.[18] опубликовали метод использования тепла для получения полихромированного метиленового синего, который комбинируют с эозином Y.[19][20][21][1] Полихромированный метиленовый синий соединяется с эозином и осаждается, образуя эозинат, который повторно растворяется в метанол.[4] Добавление Гимзы к окраске Райта увеличивает яркость «красновато-пурпурного» цвета цитоплазматических гранул.[1][21] Пятна Райта и Райта-Гимзы - это два из красок типа Романовского, которые широко используются в Соединенных Штатах и ​​в основном используются для окрашивания крови и пленок костного мозга.[21][1]

Пятно лейшмана

Основная статья: Пятно лейшмана

В 1901 г. Уильям Лейшман[22] появилось пятно, похожее на пятно Луи Дженнера, но с заменой чистого метиленового синего на полихромированный метиленовый синий.[19][15][4] Краситель Лейшмана получают из эозината полихромированного метиленового синего и эозина Y с использованием метанола в качестве растворителя.[4]

Пятно Гимзы

Основная статья: Пятно Гимзы

Краситель Гимза состоит из «Azure II» и эозина Y с метанолом и глицерином в качестве растворителя.[15] «Лазурный II» считается смесью лазурного B (который Гимза назвал «лазурным I») и метиленового синего, хотя точный состав «лазурного I» считается коммерческой тайной.[4][15]Сопоставимые составы с использованием известных красителей опубликованы и коммерчески доступны. Пятно Гимзы считается стандартным красителем для обнаружения и идентификации малярийного паразита.[5]

Клиническое значение

Патология крови и костного мозга

Бронхоальвеолярный лаваж образец окрашен Diff-Quik, коммерческий вариант окраски по Романовскому, широко используемый в цитопатологии

При исследовании крови широко используются окраски по типу Романовского в виде мазки крови, а в микроскопическом исследование костного мозга биопсия и аспирируйте мазки.[1][23] Исследование крови и костного мозга может иметь важное значение при диагностике множества заболеваний крови.[1][23] В Соединенных Штатах широко используются варианты окраски по методу Романовского по Райту и Райту-Гимзе,[1] в то время как в Европе широко применяется краситель Гимза.[1]

Обнаружение малярии и других паразитов

Из пятен типа Романовского пятно Гимзы особенно важно в обнаружение и идентификация малярийных паразитов в образцах крови.[5][15] Тесты на обнаружение антигена малярии являются альтернативой окрашиванию и микроскопическому исследованию мазков крови для выявления малярии.[5]

Использование в цитопатологии

Морилки типа Романовского также используются для окрашивания цитопатологический образцы, такие как произведенные из тонкоигольные аспираты и спинномозговая жидкость из люмбальные проколы.[24]

История

Дмитрий Леонидович Романовский (1861-1921).

Хотя существуют споры о том, кто заслуживает похвалы за этот общий метод окрашивания, популярное использование приписывает его Дмитрию Леонидовичу Романовскому.[14][16][19]

В 1870-е гг. Пол Эрлих использовали смесь кислотных и основных красителей, включая кислотный фуксин (кислотный краситель) и метиленовый синий (основной краситель) для исследования мазков крови.[25][26][27][28][16] В 1888 году Чеслав Иванович Чензинский использовал метиленовый синий, но заменил кислый фуксин, который использовал Эрлих, на эозин.[14][27][28] Комбинация красителей Чензинского могла окрасить малярия паразит (член род Плазмодий ).[28][19] Пятна Эрлиха или Чензинского не производили эффекта Романовского, так как метиленовый синий, который они использовали, не был полихромирован.[16]

Дмитрий Романовский в 1890 году опубликовал предварительные результаты своего окрашивания крови (комбинация старого метиленового синего и эозина), в том числе результаты, полученные при применении к крови, зараженной малярией.[6] Такое использование полихромированного метиленового синего отличало окраску Романовского (и последующие составы) от красок Эрлиха и Чензинского, в которых отсутствовал фиолетовый оттенок, связанный с эффектом Романовского.[16] В публикации Романовского 1890 года не было описания того, как он модифицировал свой раствор метиленового синего,[6][16] но в своей докторской диссертации 1891 года он описал метиленовый синий, который лучше всего используется после того, как на поверхности начала формироваться плесень.[6][16] Помимо использования выдержанного раствора метиленового синего, окраска по Романовскому была основана на технике окрашивания Чензинского.[16] Использование Романовским своего метода для изучения патазита малярии объясняется постоянным интересом к его методу окрашивания.[26]

Эрнст Малаховский

Эрнсту Малаховскому приписывают независимое наблюдение того же сочетания пятен, что и Дмитрию Романовскому в 1891 году.[6][13] хотя ему также приписывают то, что он первым сделал это.[16][19] Малаховский был первым, кто использовал сознательно полихромированный раствор метиленового синего,[15] чего Малаховский добился добавлением бура к красящей смеси.[16] Сообщается, что Малаховский продемонстрировал пятно 15 июня 1890 года и в том же году опубликовал статью, «описывающую его публичную демонстрацию».[19] Оба метода Романовского и Малаховского были способны окрасить ядро и цитоплазма из малярия паразит, когда до этого момента использованные красители окрашивали только цитоплазму.[19]

Густав Гимза.

В 1899 году Луи Леопольд Дженнер разработал более стабильную версию окраски метиленового синего и эозина, собирая осадок который образуется в смесях на водной основе и повторно растворяет его в метанол.[28][15][4] Пятна типа Романовского, полученные из собранных осадков, иногда называют эозинаты.[4] Помимо увеличения стойкости пятна, использование метанола в Пятно Дженнера имел эффект фиксация образцы крови,[4] хотя версия пятна Дженнера не производит эффекта Романовского.[28][19][15]

Ричард Мэй и Людвиг Грюнвальд в 1892 г. опубликовал версию пятна (ныне известного как Пятно Мая – Грюнвальда ), которая аналогична версии, предложенной Дженнером в 1899 году, и также не дает эффекта Романовского.[28][19][15]

В 1901 году оба Карл Рейтер и Уильям Лейшман[22] появились пятна, которые сочетали в себе использование Луи Дженнера спирта в качестве растворителя и использование Малаховского полихромированного метиленового синего.[19][15][4] Пятно Рейтера отличалось от пятна Дженнера использованием этиловый спирт вместо метанола, и Leishman отличался от Jenner, используя эозин B вместо эозин Y.[19][4]

Джеймс Гомер Райт в 1902 г. опубликовал[18] метод с использованием тепла для полихромирования метиленового синего, который он объединил с эозином Y. Этот метод известен как Пятно Райта.[19][20]

Густава Гимзы Имя также стало ассоциироваться с пятном, поскольку ему приписывают публикацию полезной формулировки и протокола в 1902 году.[13][6][26] Гимза попытался использовать комбинации чистых красителей, а не растворы полихромированного метиленового синего, состав которых сильно различается.[20][19][15] Гимза продал права на производство своего пятна, но так и не опубликовал полностью подробностей о том, как он его создал.[19] хотя считается, что он использовал комбинацию лазурного B и метиленового синего.[15] Гимза опубликовал ряд модификаций своих красок между 1902 и 1934 годами. В 1904 году[29] он предложил добавить в пятно глицерин вместе с метанолом, чтобы повысить его стабильность.[23][19]

Порошки красителей Giemsa, произведенные в Германии, широко использовались в Соединенных Штатах до прекращения поставок во время Первая Мировая Война, что привело к более широкому использованию метода Джеймса Гомера Райта для полихромирования метиленового синего.[19][1]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б c d е ж грамм час я j Тейл, Карл С. (2012). «Обработка костного мозга и нормальная морфология». Практика лабораторной гематологии. С. 279–299. Дои:10.1002 / 9781444398595.ch22. ISBN  9781444398595.
  2. ^ Bain, Barbara J .; Бейтс, Имельда; Лаффан, Майк А. (11 августа 2016 г.). «Глава 4: Методы приготовления и окрашивания мазков крови и костного мозга». Практическая гематология Дейси и Льюиса (12-е изд.). Elsevier Health Sciences. ISBN  978-0-7020-6925-3.
  3. ^ а б c d Горобин, Р.В. (2011). «Как работают пятна Романовского и почему они остаются ценными, включая предлагаемый универсальный механизм окрашивания Романовского и рациональную схему устранения неполадок». Биотехника и гистохимия. 86 (1): 36–51. Дои:10.3109/10520295.2010.515491. ISSN  1052-0295.
  4. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о п Маршалл, П. Н. (1978). «Пятна по Романовскому в гематологии». Гистохимический журнал. 10 (1): 1–29. Дои:10.1007 / BF01003411. PMID  74370.
  5. ^ а б c d Ли, Цигуй; Weina, Peter J .; Миллер, Р. Скотт (2012). «Анализ малярии». Практика лабораторной гематологии. С. 626–637. Дои:10.1002 / 9781444398595.ch48. ISBN  9781444398595.
  6. ^ а б c d е ж грамм Безруков, А.В. (2017). «Окраска по Романовскому, эффект Романовского и размышления о научном приоритете». Биотехника и гистохимия. 92 (1): 29–35. Дои:10.1080/10520295.2016.1250285. ISSN  1052-0295.
  7. ^ Рибатти, Доменико (2018). «Окрашивание тучных клеток: исторический обзор». Международный архив аллергии и иммунологии. 176 (1): 55–60. Дои:10.1159/000487538. ISSN  1018-2438.
  8. ^ Романовский Д.Л. (1890). "Къ вопросу о строении чужеядныхъ малярiи". Врачъ. 52: 1171–1173.
  9. ^ Романовский Д.Л. К вопросу о паразитологи и терапии болотной лихорадки. Диссертация на степень доктора медицины. Спб. 1891 г., 118 с.
  10. ^ Романовский Д. (1891). "Zur Frage der Parasitologie und Therapie der Malaria". Санкт-Петербург Med Wochenschr. 16: 297–302, 307–315.
  11. ^ Хоробин RW, Вальтер KJ (1987). «Понимание окраски по Романовскому. I: Эффект Романовского-Гимзы в мазках крови». Гистохимия. 86 (3): 331–336. Дои:10.1007 / bf00490267. PMID  2437082.
  12. ^ Воронцов-Дашкофф К.К. (2002). "Пятно Райта-Гимзы. Секреты раскрыты". Clin Lab Med. 22 (1): 15–23. Дои:10.1016 / S0272-2712 (03) 00065-9. PMID  11933573.
  13. ^ а б c d е ж грамм Виттекинд, Д. Х. (1983). «О природе окрашивания по Романовскому-Гимасу и его значению для цитохимии и гистохимии: общий взгляд». Гистохимический журнал. 15 (10): 1029–1047. Дои:10.1007 / BF01002498. ISSN  0018-2214.
  14. ^ а б c d Кукси, CJ (2017). «Причуды номенклатуры красителей. 8. Метиленовый синий, лазурный и фиолетовый». Биотехника и гистохимия. 92 (5): 347–356. Дои:10.1080/10520295.2017.1315775. ISSN  1052-0295.
  15. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о Лилли, Ральф Дугалл (1977). Биологические пятна Х. Дж. Конна (9-е изд.). Балтимор: Уильямс и Уилкинс. с. 692 с.
  16. ^ а б c d е ж грамм час я j Лилли, Р. Д. (1978). "Романовский-Малаховский окрашивает так называемое Романовское пятно: использование Малаховским 1891 г. щелочного полихромированного метиленового синего для лечения малярийных плазмодий". Технология пятен. 53 (1): 23–28. Дои:10.3109/10520297809111439.
  17. ^ Piaton, E .; Fabre, M .; Губен-Версини, I .; Bretz-Grenier, M-F .; Courtade-Saïdi, M .; Винсент, S .; Belleannée, G .; Thivolet, F .; Boutonnat, J .; Debaque, H .; Fleury-Feith, J .; Vielh, P .; Egelé, C .; Bellocq, JP .; Michiels, JF .; Кочанд-Приоллет Б. (октябрь 2016 г.). «Рекомендации по окрашиванию Мая-Грюнвальда-Гимзы в гематологии и негинекологической цитопатологии: рекомендации Французского общества клинической цитологии (SFCC) и Французской ассоциации обеспечения качества в анатомической и цитологической патологии (AFA»). Цитопатология. 27 (5): 359–368. Дои:10.1111 / cyt.12323.
  18. ^ а б Райт Дж. Х. (1902). «Быстрый метод дифференциального окрашивания пленок крови и малярийных паразитов». J Med Res. 7 (1): 138–144. ЧВК  2105822. PMID  19971449.
  19. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о п Крафтс, КП; Hempelmann, E; Олексин, Би Джей (2011). «Фиолетовый цвет: от королевской семьи до лаборатории, с извинениями перед Малаховски». Биотехника и гистохимия. 86 (1): 7–35. Дои:10.3109/10520295.2010.515490. ISSN  1052-0295.
  20. ^ а б c Gatenby, J. B .; Лучи, Х. В. (1950). Vade-Mecum микротомиста (11-е изд.). Филадельфия: Компания Blackstone.
  21. ^ а б c Воронцов-Дашкофф К.К. (2002). "Пятно Райта-Гимзы. Секреты раскрыты". Clin Lab Med. 22 (1): 15–23. Дои:10.1016 / S0272-2712 (03) 00065-9. PMID  11933573.
  22. ^ а б Лейшман В. (1901). «Примечание о простом и быстром способе получения окраски по Романовскому на малярийных и других пленках крови». Br Med J. 2 (2125): 757–758. Дои:10.1136 / bmj.2.2125.757. ЧВК  2507168. PMID  20759810.
  23. ^ а б c Петерсон, Пауэрс; Макнил, Шейла; Гулати, Джин (2012). «Клеточно-морфологический анализ периферической крови». Практика лабораторной гематологии. С. 10–25. Дои:10.1002 / 9781444398595.ch2. ISBN  9781444398595.
  24. ^ Крафтс, КП; Pambuccian, SE (2011). «Окрашивание по Романовскому в цитопатологии: история, преимущества и ограничения». Биотехника и гистохимия. 86 (2): 82–93. Дои:10.3109/10520295.2010.515492. ISSN  1052-0295.
  25. ^ Эрлих П. (1880). "Methodologische Beiträge zur Physiologie und Pathologie der Verschiedenen Formen der Leukocyten" (PDF). З Клин Мед. 1: 553–560. Архивировано из оригинал (PDF) 19 июля 2011 г.
  26. ^ а б c Bracegirdle, Brain (1986). История микротома: эволюция микротома и разработка препаратов ткани (2-е изд.). Линкольнвуд, Иллинойс: Science Heritage Ltd. ISBN  978-0940095007.
  27. ^ а б Крафтс, Кристина; Хемпельманн, Эрнст; Олексин, Барбара Дж. (2011). «В поисках малярийного паразита». Паразитологические исследования. 109 (3): 521–529. Дои:10.1007 / s00436-011-2475-4. ISSN  0932-0113.
  28. ^ а б c d е ж Воронцов-Дашкофф, Кристин Полин Крафтс (1993). "Пятно Эрлиха-Чензинского-Плен-Малаховского-Романовского-Нохт-Дженнер-Мэй-Грюнвальд-Лейшман-Рейтер-Райт-Гимза-Лилли-Роу-Уилкокс: тайна раскрывается". Клиники лабораторной медицины. 13 (4): 759–771. Дои:10.1016 / S0272-2712 (18) 30406-2. ISSN  0272-2712.
  29. ^ Гимза Г (1904). "Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung". Centralbl F Bakt Etc. 37: 308–311.