Электроблоттинг - Electroblotting

Схематическое изображение передаточного стека.[1]

Электроблоттинг это метод в молекулярная биология /биохимия /иммуногенетика перевести белки или же нуклеиновые кислоты на мембрану с помощью ПВДФ или же нитроцеллюлоза, после гель-электрофорез.[2][3] Затем белок или нуклеиновая кислота могут быть дополнительно проанализированы с использованием зондов, таких как специфические антитела, лиганды подобно лектины, или пятна. Этот метод можно использовать со всеми полиакриламидными и агарозными гелями. Альтернативный метод переноса белков из геля - капиллярный блоттинг.

Разработка

Этот метод был запатентован в 1989 году Уильямом Дж. Литтлхейлзом под названием «Метод электроблоттинга для переноса образцов после электрофореза полиакриламида или подобного геля на мембрану.[1][4]

Процедура электроблоттинга

Этот метод основан на токе и буферном растворе для переноса белков или нуклеиновых кислот на мембрану. После электрофореза устанавливают стандартный резервуар или систему полусухого блоттинга. Пакет собирается в следующем порядке от катода к аноду: губка | три листа фильтровальной бумаги, пропитанной буфером для переноса | гель | ПВДФ или нитроцеллюлозная мембрана | три листа фильтровальной бумаги, пропитанной буфером для переноса | губка. Необходимо, чтобы мембрана располагалась между гелем и положительно заряженным анодом, так как ток и образец будут двигаться в этом направлении. После того, как пакет подготовлен, его помещают в систему переноса, и в течение подходящего периода времени в зависимости от используемых материалов подают ток подходящей величины.

Обычно гель для электрофореза окрашивается Кумасси бриллиантовый синий после передачи, чтобы убедиться, что было перемещено достаточное количество материала. Поскольку белки могут сохранять или восстанавливать часть своей структуры во время блоттинга, они могут реагировать со специфическими антитела давая начало термина иммуноблоттинг. В качестве альтернативы белки могут реагировать с лиганды подобно лектины давая начало термина близость промокание.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б Р. К. Дубей (2014). Продвинутая биотехнология. С. Чанд Паблишинг. С. 199–. ISBN  978-81-219-4290-4.
  2. ^ Дэвид Шихан (30 апреля 2013 г.). Физическая биохимия: принципы и применение. Джон Вили и сыновья. С. 206–. ISBN  978-1-118-68748-2.
  3. ^ М. П. Бансал (1 января 2013 г.). Молекулярная биология и биотехнология: основные экспериментальные протоколы. Институт энергетики и ресурсов (TERI). С. 141–. ISBN  978-81-7993-379-4.
  4. ^ «Патент США 4840714». Архивировано из оригинал на 2007-09-29. Получено 2007-05-24.

внешняя ссылка