ДНК-полимераза Pfu - Pfu DNA polymerase

Для получения информации о термине вирусологии см. Блок формирования налета.
ДНК-полимераза Pfu
Идентификаторы
ОрганизмPyrococcus furiosus
Символpol
PDB4ahc
UniProtP61875

Pfu ДНК-полимераза фермент, обнаруженный в гипертермофильных Археон Pyrococcus furiosus, где он функционирует, чтобы скопировать организм ДНК во время деления клеток. В лабораторных условиях Pfu используется для усиления ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), где фермент выполняет центральную функцию копирования новой цепи ДНК на каждом этапе удлинения.

Это семья B ДНК-полимераза. Имеет РНКаза H -подобный 3'-5'-экзонуклеазный домен, типичный для полимеразы B-семейства, такой как ДНК-полимераза II.[1]

Вычитка Pfu полимераза

Pfu ДНК-полимераза обладает превосходной термостабильностью и свойствами корректуры по сравнению с Taq ДНК-полимераза. В отличие от Taq ДНК-полимераза, Pfu ДНК-полимераза имеет от 3 'до 5' экзонуклеаза корректирующая деятельность, что означает, что по мере того, как ДНК собирается из 5 'конец к 3 'конец, активность экзонуклеазы немедленно удаляет нуклеотиды неправильно вставлен на 3'-конце растущей цепи ДНК. Как следствие, Pfu Фрагменты ПЦР, полученные ДНК-полимеразой, будут иметь меньше ошибок, чем Taq-генерированные вставки ПЦР.

В продаже Pfu обычно приводит к частоте ошибок 1 из 1,3 миллиона пар оснований и может давать 2,6% мутировавших продуктов при амплификации фрагментов размером 1 т.п.н. с помощью ПЦР. Тем не мение, Pfu работает медленнее и обычно требует 1-2 минуты на цикл для амплификации 1 килобайт ДНК при 72 ° C. С помощью Pfu ДНК-полимераза в реакциях ПЦР также приводит к образованию продуктов ПЦР с тупым концом.[2]

Pfu Следовательно, ДНК-полимераза превосходит Taq ДНК-полимераза для методов, требующих синтеза ДНК с высокой точностью, но также может использоваться в сочетании с Taq полимеразы, чтобы получить точность Pfu со скоростью Taq полимеразная активность.[3]

История

Ученые под руководством Эрика Матура из биотехнологической компании Stratagene, базирующейся в Ла-Хойя, Калифорния, открыли ДНК-полимеразу Pfu, которая демонстрирует значительно более высокую точность репликации, чем ДНК-полимераза Taq, в 1991 году.[4] Они получили патенты на экзонуклеаз-дефицитные Pfu и полный Pfu в 1996 г.[5]

Прочие полимеразы из Пирококк штаммы, такие как "Deep Vent" (Q51334) из штамма ГБ-Д и ДНК-полимераза Pwo также видел применение.[3]

Рекомендации

  1. ^ InterPro Protein View: P61875
  2. ^ Agilent Technologies. "Руководство по эксплуатации ДНК-полимеразы PfuTurbo № 600250" (PDF).
  3. ^ а б ван Пелт-Веркуил Э, ван Белкум А, Хейс JP (2008). «Taq и другие термостабильные ДНК-полимеразы». Принципы и технические аспекты амплификации ПЦР. С. 103–18. Дои:10.1007/978-1-4020-6241-4_7. ISBN  978-1-4020-6240-7.
  4. ^ Лундберг К.С., Сапожник Д.Д., Адамс М.В., Шорт Дж. М., Зорге Дж. А., Матур Э. Дж. (Декабрь 1991 г.). «Высокоточная амплификация с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, выделенной из Pyrococcus furiosus». Ген. 108 (1): 1–6. Дои:10.1016 / 0378-1119 (91) 90480-у. PMID  1761218.
  5. ^ Патент США 5,489,523 , Патент США 5,545,552

внешняя ссылка